تخمیر اکسیداتیو Oxidative fermentative OF

آزمون اکسیداتیو-تخمیری (OF) توسط هیو و لیفسون در سال 1953 ساخته شد. آن ها برای ایجاد تمایز بین باکتری های اکسیداتیو (که فقط در شرایط هوازی از کربوهیدرات ها اسید تولید می کنند) و باکتری های تخمیری (که هم در شرایط هوازی و هم بی هوازی اسید تولید می کنند) از محیط OF استفاده کردند.

میکروارگانیسم های ساکارولیتیک گلوکز را به صورت تخمیری یا اکسیداتیو مصرف می کنند. محصولات نهایی تخمیر، اسیدهای مخلوط نسبتاً قوی هستند که می توانند در یک محیط آزمایش تخمیری معمولی شناسایی شوند. با این حال، اسیدهای تشکیل شده در تخریب اکسیداتیو گلوکز بسیار ضعیف و کم هستند و برای تشخیص، به محیط تخمیر اکسیداسیون حساس تری از محیط OF طراحی شده توسط هیو و لیفسون مورد نیاز است. این محیط با افزایش مقدار گلوکز محیط و نیز کاهش مقدار پپتون ساخته شد.

تغییرات محیط OF هیو و لیفسون

• غلظت آگار از 3٪ به 2٪ کاهش یافته و از نظر قوام نیمه جامد می شود (این امر در تعیین تحرک ارگانیسم نیز کمک می کند).
• غلظت پپتون از 11٪ به 2٪ کاهش می یابد. (کاهش مقدار محصول قلیایی تولید شده توسط متابولیسم پپتون ؛ بنابراین باعث کاهش اثر خنثی سازی این محصولات می شود).
• غلظت کربوهیدرات 0.5٪ تا 1.0٪ افزایش می یابد (افزایش غلظت گلوکز در محیط، تولید این اسیدهای ضعیف را به حدی افزایش می دهد که توسط شاخص بروموتیمول قابل تشخیص باشد.)

اساس

آزمایش اکسیداتیو – تخمیری مشخص می کند که باسیل های گرم منفی خاصی گلوکز را با تخمیر یا تنفس هوازی متابولیزه می کنند (به صورت اکسیداتیو). در طی فرآیند بی هوازی تخمیر، پیروات بسته به نوع تخمیر به انواع اسیدهای مخلوط تبدیل می شود. غلظت بالای اسید تولید شده در طی تخمیر، نشانگر آبی برومیتمول را در محیط OF از سبز به زرد در حضور یا عدم وجود اکسیژن تبدیل می کند.

برخی از باکتری های گرم منفی غیر تخمیر کننده، گلوکز را با استفاده از تنفس هوازی متابولیزه می کنند و بنابراین فقط مقدار کمی اسید ضعیف در طول گلیکولیز و چرخه کربس تولید می کنند. کاهش میزان پپتون و افزایش مقدار گلوکز، تشخیص اسیدهای ضعیف تولید شده را تسهیل می کند. بافر دی پتاسیم فسفات برای تقویت بیشتر تشخیص اسید اضافه می شود.

کاربرد

از آزمون OF برای تعیین اینکه آیا باکتری های گرم منفی کربوهیدرات ها را به صورت اکسیداتیو، با تخمیر متابولیزه می کنند یا غیر ساکرولیتیک هستند کاربرد دارد.

محیط

مواد تشکیل دهنده محیط پایه OF به شرح زیر است:

• کلرید سدیم: 5.0 گرم
• فسفات دی پتاسیم: 0.3 گرم
• پپتون: 2.0 گرم
• بروموتیمول بلو: 0.03 گرم
• آگار: 3.0 گرم
• گلوکز: 10 گرم
• آب: 1000 میلی لیتر

قبل از اتوکلاو کردن، pH باید روی 7.1 تنظیم شود. سپس اتوكلاو محیط در 121 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه انجام می شود و یك محلول استریل شده فیلتر از محلول 10٪ كربوهیدرات بصورت آسپتیك به محیط اضافه می شود تا غلظت نهایی 1٪ شود.