خدمات سنتز cDNA

آزمایشگاه ژنیران با هدف ارائه بهترین خدمات در کمترین زمان به محققین، دانشجویان و سایر مراکز، سنتز cDNA از RNA را با قیمت دانشجویی انجام می دهد. سنتز cDNA می تواند از RNA استخراج شده از بافت ها و میکروارگانیسم های مختلف انجام پذیرد.

در آزمایشگاه ژنیران سنتز cDNA با استفاده از کیت های تجاری برند های معتبر همراه با پرایمر های اختصاصی و یا عمومی (Random hexamer وOligo (dt)) به انجام رسیده و cDNA با کیفیت بالا به متقاضیان ارائه می گردد. همچنین آزمایشگاه ژنیران با به کارگیری مواد درجه یک، دستگاه های پیشرفته در این زمینه و با بهره گیری از تیم مجرب و با سابقه در کوتاه ترین زمان با بیشترین دقت آماده خدمت رسانی می باشد.

سنتز CDNA اولین گام در بسیاری از پروتکل های زیست شناسی مولکولی، از جمله آنالیز بیان ژن با استفاده از Real-Time PCR است. کیفیت آزمایش های مرحله بعدی، نیازمند تولید cDNA با کیفیت بالا است. کیت های سنتز cDNA فرآیند رونویسی معکوس (رونوشت برداری معکوس)  را آسان تر و سریع تر کرده اند.

🔴 زمان تحویل: یک روز کاری 🔴 نحوه محاسبه قیمت:

 

نحوه‌ی تحویل پروژه:

کیفیت cDNA سنتز شده، از طریق کاربری آن در یک ران Realtime-PCR با استفاده از پرایمرهای یک ژن مرجع بررسی شده و پس از اطمینان از کیفیت مطلوب، ارائه می گردد.

خدمات جانبی:

آزمایشگاه ژنیران در حال حاضر با دارا بودن تجهیزات در زمینه ژنتیک مولکولی علاوه بر خدمات سنتز cDNA، خدمات مربوط به آن را نیز ازائه می کند. دانشجویان و پژوهشگران محترم می توانند کار خود را از سطح استخراج RNA در آزمایشگاه ژنیران شروع کرده و پس از استخراج آن از خدمات سنتز cDNA بهره گرفته و سپس به سنجش بیان آن با تکنیک real-time PCR بپردازند.

برای کسب اطلاعات بیشتر از خدمات هریک از بخش های زیر، کلیک کنید:

• خدمات استخراج RNA

• خدمات Real-Time PCR

تجهیزات مرتبط با سنتز cDNA

✔برای مشاهده جزییات تجهیزات و دستگاه های آزمایشگاه ژنیران اینجا کلیک کنید.

در رابطه با سنتز CDNA بیشتر بدانیم…

در سنتز cDNA دو نکته بسیار حائز اهمیت است؛ انتخاب نوع پرایمر و آنزیم رونوشت بردار معکوس(RT Enzyme). عموماً پرایمر های Random hexamer وOligo (dt)  در سنتزCDNA مورد استفاده قرار می گیرند. این پرایمر ها از نوع غیر اختصاصی بوده و توالی ها را به صورت غیر اختصاصی شناسایی می‌کنند.

در کمی سازی تعداد رونوشت های RNA، رونویسی معکوس یک مرحله اساسی است که در آن رونوشت های RNA به عنوان الگو، برای سنتز cDNA مورد استفاده قرار می گیرد. ظهور کیت های سنتز  cDNA رونوشت برداری معکوس را ساده تر و سریع تر نموده است که منجر به تولید یک محصول با کیفیت می شود. دو معیارمهم برای انتخاب یک کیت سنتز cDNA مناسب، نوع پرایمرها و آنزیم رونوشت بردار معکوس می باشد.

 

پرایمرهای مورد استفاده در این مرحله یا oligo(dT) هستند یا Random hexamer در شرایط خاصی ممکن است پرایمرهای اختصاصی نیز استفاده شود. Oligo(dT) پرایمر های تکراری حاوی باز تیمین هستند. این پرایمرها توانایی اتصال به دم poly-A در انتهای رشته های mRNA را دارند.

 

پرایمر Random hexamer، پرایمر هایی با 6 باز و با توالی های اتفاقی هستند که می توانند به هر جایی در هر رونوشت RNA متصل شده و محل آغاز فعالیت آنزیم رونوشت بردار معکوس را فراهم کنند.

سنتز cDNA با استفاده از پرایمرهای اختصاصی بالاترین اختصاصیت را ایجاد می کند، اما cDNA سنتز شده با استفاده از پرایمرهای اختصاصی برای سایر آزمایشات قابل استفاده نیست پس اگر قصد دارید چند ژن مختلف را مورد بررسی قرار دهید برای سنتز cDNA  از پرایمر  غیر اختصاصی استفاده کنید تا cDNA  شما  برای انجام PCR با پرایمر های مختلف مناسب باشد.

 

آنزیم رونوشت بردار معکوس فعالیت های متعددی دارد. فعالیت DNA پلی مرازی وابسته به RNA این آنزیم، مسئول ساخت رشته‌ی اول cDNA می باشد. آنزیم نسخه بردار معکوس همچنین دارای خاصیت DNA پلی مرازی وابسته به DNA هست. خاصیت سوم این آنزیم، فعالیت نوکلئازی شامل RNase H است که منجر به تخریب RNA موجود در هیبرید RNA-DNA می شود. در کیت های مختلف، از دو نوع آنزیم رونوشت بردار معکوس استفاده می شود:

 

1)Avian myeloblastosis virus(AMV) reverse transcriptase

 

2)Molony murine leukemia virus(MMLV) reverse transcriptase

 

سنتزcDNA  بسیار پرکاربرد است در زیر به برخی کاربرد های سنتزcDNA  در تحقیقات و پزشکی اشاره می‌شود:

 

تاسیس کتابخانه های cDNA

کتابخانه ژنی cDNA مجموعه ای ترکیبی از قطعات ژنی کلون شده سلولهای میزبان است که بخشی از ترانسکریپتوم ارگانیسم را میسازند می‌باشد. cDNA یا Complementary DNA ، مولکولهای DNA هستند که از طریق رونویسی معکوس mRNA ساخته میشوند و بنابراین فاقد اینترونهایی هستند که در DNA ژنومی وجود دارد.

DNA که وارد کتابخانه cDNA میشود کروموزومی نیست بلکه DNA یی است که از روی mRNA های موجود در سلول گرفته شده است .تهیه کتابخانه ژنی cDNA مراحل  زیادی دارد که عبارتند از استخراج کل RNA ، حذف DNA و پروتئین، جداسازی mRNA از سایر RNA ها و در نهایت تهیه cDNA .

 

  RT-PCRو مطالعات آنالیز بیان ژن

انواع مختلفی از Real-Time PCR  وجود دارند که یکی از آن ها RT-PCR  است این روش وقتی استفاده میشود که هدف، سنجش میزان بیان یک ژن خاص باشد، به این صورت که باید  پیش از آغاز فرایند Real-Time PCR   ، استخراج RNA و تبدیل آن به cDNA را انجام دهیم. اساس این تکنیک، ارتباط مقدار RNA رونویسی شده به میزان بیان ژن موردنظر است و می‌توان با استفاده از آن میزان بیان ژ‌ن‌ها را در شرایط مختلف مقایسه کرد.