ابزار و وسایل آزمایشگاهی شامل، محلول ها کیت ها، ویکی ژن
اشدون آگار (Ashdown’s Agar): ترکیب، اصول، آماده‌سازی، نتایج و کاربرد
فهرست مطالب
نمایش
مقدمه‌ای بر محیط کشت اشدون آگار
محیط کشت اشدون آگار یک محیط کشت انتخابی برای جداسازی و شناسایی بورخولدریا پسومالئی (Burkholderia pseudomallei، باکتری که باعث بیماری ملیوئیدوز می‌شود) است.
محیط کشت اشدون برای اولین بار توسط LR Ashdown در سال 1979 معرفی شد.
ترکیبات اشدون آگار
| ترکیبات | گرم در لیتر |
| Tryptone soya broth | 10 گرم |
| آگار | 15 گرم |
| گلیسرول (Glycerol) | 40 میلی‌لیتر |
| جنتامایسین (Gentamicin) | 4 میلی‌گرم |
| کریستال ویولت 0.1% (Crystal violet) | 5 میلی‌لیتر |
| نوترال رد 1 % (Neutral Red) | 5 میلی‌لیتر |
| آب مقطر | 950 میلی‌لیتر |
اصول اشدون آگار
- این محیط حاوی کریستال ویولت و جنتامایسین به عنوان عوامل انتخابی برای سرکوب رشد باکتری‌های دیگر است.
- کلنی‌های pseudomallei نیز نوترال رد موجود در محیط را جذب می‌کنند، که این امر به تشخیص آن از سایر باکتری‌ها کمک می‌کند.
- جنتامایسین رشد pseudomallei را اندکی مهار می‌کند و بنابراین نمونه‌های تلقیح شده روی اشدون آگار به جای 48 ساعت باید حداقل 96 ساعت انکوبه شوند.
- این محیط همچنین با 4% گلیسرول غنی شده است که برای رشد برخی از سویه‌های pseudomallei مورد نیاز است.
- بعد از 24 ساعت انکوباسیون، کلنی‌های متوسط اغلب به رنگ صورتی کم رنگ، شفاف و نقطه نقطه هستند و در طی 2 روز بعدی به رنگ صورتی مایل به ارغوانی، صاف و کمی خشک در می‌آیند. بارزترین ویژگی pseudomallei درخشندگی متالیک آن و تبدیل شدن به کلنی‌های خشک و چروکیده بعد از 96 ساعت می‌باشد.
آماده سازی و روش استفاده از اشدون آگار
- همه مواد را در یک بطری آزمایشگاهی مخلوط کنید.
- بطری را در دمای 121 درجه سانتی‌گراد به مدت 15 دقیقه اتوکلاو کنید.
- بطری را تا دمای 50 درجه سانتی‌گراد سرد کنید، سپس جنتامایسین را با غلظت نهایی 4 میلی‌گرم در لیتر اضافه کنید
- آگار را در پتری‌دیش‌ها بریزید.
توجه: محلول کریستال ویولت 0.1% قبل از استفاده باید در دمای 37 درجه سانتی‌گراد به مدت دو هفته انکوبه شود تا از رنگ آمیزی مطلوب اطمینان حاصل شود.
- 10 میلی‌لیتر از لایه بالایی محلول نمک پایه ترئونین (Threonine) به اضافه محیط کشت 50 میلی‌گرم در لیتر کولیستین (Colistin) را به یک پلیت اشدون آگار اضافه و به صورت خطی تلقیح (برای دستیابی به کلنی‌های منفرد) و با استفاده از هود ایمنی بیولوژیکی میکروبیولوژی (BSC) زیرکشت دهید.
- پلیت اشدون آگار را در دمای 40 درجه سانتی‌گراد در هوا انکوبه کنید.
- پلیت اشدون آگار را روزانه به مدت 7 روز در BSC از نظر وجود کلنی‌های pseudomallei بررسی کنید.
تفسیر نتیجه اشدون آگار
| ارگانیسم | رشد |
| Burkholderia pseudomallei | کلنی‌های ارغوانی دایره‌ای بسیار چروکیده روی آگار بعد از 48 ساعت |
| Burkholderia thailandensis | کلنی‌های دایره‌ای ارغوانی |
موارد استفاده از اشدون آگار
- در حال حاضر آگار انتخابی اشدون (Ashdown’s selective agar (ASA))، محیط کشت رایج برای ایزولاسیون و شناسایی احتمالی pseudomallei در مناطقی است که بیماری ملیوئیدوز بومی می‌باشد.
- برای ایزولاسیون انتخابی pseudomallei از نمونه‌های بالینی که از مکان‌های غیر استریل (مانند خلط) گرفته شده و همچنین برای شناسایی مورفولوژی خاص B. pseudomallei استفاده می‌شود.
محدودیت‌های اشدون آگار
- آزمایشات بیشتری برای شناسایی pseudomallei باید انجام شود. هر ارگانیسمی که ظاهری به صورت کلنی‌های معمولی B. pseudomallei در اشدون آگار داشته باشد و به کولیستین مقاوم باشد و به کوآموکسی‌کلاو (Co-amoxiclav) حساس باشد، اگر در تست تثبیت لاتکس (latex agglutination) آن مثبت باشد، احتمالاً می‌توان آن را به عنوان B. pseudomallei شناسایی کرد.
- در برخی آزمایشگاه‌های بالینی محلی گفته شده است که ASA برخی از سویه‌های pseudomallei را مهار می‌کند.
- جداسازی از خلط به خصوص زمانی که تعداد کمی pseudomallei و تعداد زیادی فلورا (flora) مجرای تنفسی فوقانی کومنسال (Commensal) وجود داشته باشند، دشوار است.
همچنین بخوانید:
- بروسلا آگار (Brucella Agar): ترکیب، اصول، روش آماده‌سازی، نتایج و کاربرد
- سابورو دکستروز آگار (SDA): ترکیب، اساس، کاربرد، تهیه و مورفولوژی کلنی
- مانیتول سالت آگار (محیط کشت MSA): ترکیبات، کاربرد، تهیه
- آگار CLED: ترکیب، اصول، روش تهیه، نتایج و کاربرد
- اندو آگار (Endo Agar): ترکیب، اصول، روش آماده‌سازی و کاربرد
مترجم: صادق حسینی‌کیا
