انجام تست های بیوشیمیایی باکتری ها
آزمایشگاه ژنیران در راستای خدمت رسانی به دانشجویان، محققین و مراکز تحقیقاتی همکار، خدمات انجام تست های بیوشیمیایی اختصاصی بر روی باکتری ها را در کمترین زمان و با قیمت مناسب ارائه می دهد. برای شناسایی باکتری ها می توان از تکنیک ها گوناگونی استفاده نمود. اما امروزه برای سهولت انجام کار و همچنین مدیریت در زمان و صرفه جویی در هزینه ها، برای شناسایی و تعیین هویت یک سویه از تست های بیوشیمیایی رایج و مربوط استفاده می شود. بنابراین با استفاده از تست های بیوشیمیایی و همچنین استفاده از محیط های اختصاصی و شاخصه هایی نظیر مورفولوژی سویه ها می توان باکتری های مجهول در نمونه را شناسایی کرد.
تجهیزات مورد نیاز:
- سمپلر
- اتوکلاو
- انکوباتور
- هود لامینار
زمان تحویل : 7 روز کاری قیمت: بستگی نوع تست و میکروارگانیسم متغییر می باشد(تماس بگیرید)
نحوه‌ی تحویل پروژه:
- تفسیر تست های انجام شده همراه با گزارش کار در یک فایل وورد همراه با عکس های مربوط به انجام تست در اختیار متقاضی قرار خواهد گرفت
روش انجام تست های بیوشیمیایی اختصاصی بر روی باکتری ها:
تست کاتالاز
این آزمون جهت تشخیص وجود آنزیم سیتوکروم اکسیداز مورد استفاده قرار می گیرد. برای انجام این آزمون از آب اکسیژنه 3 درصد استفاده می شود. آنزیم کاتالاز موجود در باکتری، این ماده خطرناک را به H2O و O2 تجزیه می‌کند. برای انجام این آزمون مقداری از کلنی باکتری را در این محلول حل نموده و در صورت تشکیل حباب به دلیل آزاد شدن اکسیژن نتیجه تست مثبت می باشد.
تست کواگولاز
کواگولاز نوعی آنزیم پروتئینی می باشد که در سطح دیواره سلولی برخی باکتری ها وجود دارد. این پروتئین می تواند به صورت متصل و همچنین ترشی باشد. با اتصال کواگولاز به فیبرینوژن و در حضور پلاسما موجب لخته و انعقاد پلاسما و همچنین تجمع پلاکت ها می شود. در نتیجه با تبدیل فیبرینوژن به فیبرین و ایجاد لخته باعث مقاومت و پایداری باکتری در برابر عوامل دفاعی بدن مانند فاگوسیتوز شدن می شود. برای شناسایی کواگولاز در باکتری از دو روش لوله ای و اسلایدی می توان استفاده کرد.
تست اکسیداز
آزمایش اکسیداز برای بررسی وجود یک سیستم سیتوکروم اکسیداز استفاده می شود که انتقال الکترون بین دهنده ی الکترون در باکتری ها و یک رنگ رودکس (tetramethyl-p-phenylene-diamine) را تسهیل می کند. و این معرف به رنگ بنفش تیره تغییر رنگ می دهد. این آزمایش برای شناسایی سودوموناس، نایسریا، آئروموناس، کمپیلوباکتر، ویبریو، بروسلا و پاستورلا استفاده می شود که همگی آن ها، این آنزیم سیتوکروم اکسیداز را تولید می کنند. روش های متنوعی برای انجام این تست وجود دارد از جمله؛ کاغذ فیلتر، روش مستقیم، روش سواپ، روش نوار تست اکسیداز و روش لوله ای. در ادامه به روش کاغذ فیلتر اکسیداز می پردازیم.
در رابطه با تست های بیوشیمیایی باکتری ها بیشتر بدانید:
واکنش های بیوشیمیایی در شناسایی ایزوله های باکتریایی و گونه های مختلف آن بسیار مهم است. در این تست ها، فاکتور های مختلفی نظیر آنزیم هایی خاص از جمله کاتالاز ، اکسیداز ، اوره آز ، ژلاتیناز و غیره که توسط باکتری تولید می شود بررسی می گردد
هر کدام از باکتری های مختلف طیف های متفاوتی از آنزیم ها را تولید می کنند به کمک آن ها می توان انواع مختلف باکتری ها را از هم افتراق داد.
تست های بیوشیمیایی مختلفی وجو دارد که به طور مختصر در ادامه به آن ها می پردازیم.
تست کاتالاز لوله ای
برای انجام آزمون کاتالاز به روش لوله ای؛
- 1-2 میلی لیتر محلول پراکسید هیدروژن را در یک لوله آزمایش بریزید.
- با استفاده از یک چوب استریل یا یک میله شیشه ای ، چندین کلنی از ارگانیسم کشت داده شده که نهایتا 18 تا 24 ساعت از آن گذشته است را بگیرید و در محلول پراکسید هیدروژن غوطه ور کنید.
- حباب زدن فوری در سوسپانسیون ایجاد شده، نشان دهنده نتیجه مثبت است.
تست کواگولاز
از تست کوآگولاز برای تمایز استافیلوکوکوس اورئوس (کوآگولاز مثبت) از استافیلوکوک های کوآگولاز منفی استفاده می شود. کوآگولاز آنزیمی است که توسط استافیلوکوکوس اورئوس تولید می شود و فیبرینوژن (محلول) موجود در پلاسما را به فیبرین (نامحلول) تبدیل می کند. استافیلوکوکوس اورئوس دو شکل کوآگولاز ، متصل و آزاد تولید می کند.
- تست اسلایدی کوآگولاز برای تشخیص کوآگولاز متصل انجام می شود.
- تست کوآگولاز لوله ای برای تشخیص کوآگولاز آزاد انجام می شود.
تست اکسیداز به روش کاغذ فیلتر خشک
- از آنجا که معرف اکسیداز ناپایدار است و باید برای آزمایش تازه باشد، این روش، یک روش خوب پیشنهادی است.
- کاغذ فیلتر شماره 1 Whatman در یک محلول 1٪ تازه ساخته شده از tertramethyl-p-phenylene-diamine dihydrochloride خیسانده می شود.
- پس از برداشتن آن ها بعد از حدود 30 ثانیه، نوارها به صورت یخ زده خشک می شوند و در یک بطری تیره و محکم که در آن با درپوش پیچ شده بسته شده، نگهداری می شوند.
- برای انجام تست، یک نوار را برداشته و در ظرف پتری یا روی یک لام قرار می دهند. سپس سطح آن را با آب مقطر مرطوب می کنند.
- کلنی مورد آزمایش را با یک لوپ یا پی پت پاستور شیشه ای یا پلاستیکی برداشته و در منطقه مرطوب آغشته می کنند. (توجه شود در انجام این تست نباید از اشیای فلزی استفاده کرد چرا که نتیجه مثبت کاذب می دهند.)
- واکنش مثبت با یک رنگ بنفش تیره حدود 5 تا 10 ثانیه بعد قابل مشاهده است. یک واکنش “تأخیری مثبت” به صورت تغییر رنگ در 10 الی 60 ثانیه بعد نمایان می شود و نهایتا نتیجه ی منفی با بی رنگ ماندن کاغذ و یا تغییر رنگ در مدت زمانی بیش از 60 ثانیه، نشان داده می شود.
مشاهده کامل بخش خدمات میکروبیولوژی