بافی کوت چیست؟ تعریف، آماده سازی، موارد استفاده

تعریف بافی کوت

بافی کوت، سوسپانسیونی غلیظ از لکوسیت‌ها و پلاکت‌ها است. بافی کوت بخشی از نمونه خون بدست آمده از فرآیند سانتریفیوژ با گرادیان چگالی را تشکیل می‌دهد.

1. در یک لوله آزمایش باریک کوچک یا یک پلاستیک سوراخ‌ دار تهیه می‌شود. نمونه خون تیمار شده با EDTA با پیپت پاستور به لوله منتقل می‌شود.
2. سپس نمونه خون در مجموع 15 دقیقه در RCF ۱۰۰۰ گرم سانتریفیوژ می‌شود. زمان انجام، ممکن است در آزمایشگاه‌ها بین 10 تا 25 دقیقه متفاوت باشد.
3. پس از سانتریفیوژ، مایع رویی حاوی پلاسما، در بالای لایه بافی کوت به یک لوله جدید منتقل می‌شود.
4. لایه بافی کوت، همراه با تعدادی گلبول قرمز، به یک انتهای لام منتقل می‌شود. بافی کوت و گلبول‌های قرمز با نوک پیپت مخلوط می‌شوند.

توجه: در مورد برخی از انگل‌ها مانند تریپانوزوم‌ها و میکروفیلاریا، مقدار کمی پلاسما همراه با بافی کوت خارج می‌شود. چرا که ممکن است این انگل‌ها در پلاسما متمرکز شوند.

5. یک لایه نازک روی لام ساخته می‌شود و لام باعث می‌شود تا در هوا خشک شود.
6. هنگامی که خشک شد، آماده سازی با متانول مطلق یا اتانول به مدت 2 دقیقه ثابت می‌شود.
7. سپس لام با استفاده از روش رنگ‌آمیزی لایه نازک Field یا با روش رنگ‌آمیزی گیمسا رنگ‌آمیزی می‌شود.
8. نمونه رنگ آمیزی شده، ابتدا با عدسی 40X و سپس با عدسی 100X بررسی می‌شود.

موارد استفاده

• از این سوسپانسیون غلیظ برای جداسازی DNA از نمونه‌های خون استفاده می‌کنند. به خصوص در مورد نمونه خون پستانداران با گلبول‌های قرمز بدون هسته، استخراج DNA از گلبول‌های سفید انجام می‌شود. چرا که لکوسیت‌ها حدود ده برابر منبع متمرکز سلول‌های هسته دار هستند.
• این تکنیک همچنین برای خالص سازی مقادیر زیادی از gDNA از اندازه‌های کوچک نمونه حائز اهمیت است‌.
• آماده سازی بافی کوت همچنین امکان تمایز گلبول‌های سفید خون را فراهم می‌کند.
• استخراج بافی کوت از نمونه خون کامل به کانسنتریشن بالایی از نمونه‌‌ی خون کمک می‌کند. این فرایند در هنگام جداسازی و جابجایی سلول، حائز اهمیت است.
• استفاده از بافی کوت، تنوع را کاهش می‌دهد، چرا که فاکتورهای اختصاصی سرم با دور ریختن حذف می‌شوند.
• این سوسپانسیون غلیظ غنی از پلاکت است. منبعی جایگزین برای روش تغلیظ پلاکت می‌باشند. زیرا آماده سازی بافی کوت باعث فعال شدن پلاکت می‌شود.
• محلول بافی کوت کمی، در آزمایشی استاندارد برای تشخیص عفونت با مالاریا یا سایر انگل‌های خونی مانند تریپانوزوم، لیشمانیا و هیستوپلاسما استفاده می‌شود.
• آماده سازی بافی کوت روش ارزان‌تری برای جداسازی سلول‌های خونی است و همچنین روش ایده‌آلی برای رفع نیاز پلاکت‌ها است.

همچنین بخوانید:

• پروتئین های پلاسما (Plasma Proteins): تعریف، ساختار و کارکردها
• بازوفیل چیست؟ تعریف، ساختار، ایمنی و عملکرد
• ائوزینوفیل چیست؟ تعریف، ساختار، نقش ایمنی و کارکردها
• اولتراسانتریفیوژ: اصول، انواع، قطعات، روش کار، موارد استفاده
• سانتریفیوژ چیست؟

منبع

مترجم: شقایق مرتاضی