تست تخمیر فنول رد: اصول، روش تهیه، کاربرد و تفسیر

فهرست مطالب نمایش

مقدمه‌ای بر تست تخمیر فنول رد

محیط‌های تخمیر برای تمایز ارگانیسم‌ها بر اساس توانایی آنها در تخمیر کربوهیدرات‌های ترکیب شده در محیط پایه استفاده می‌شود.
فنول رد براث (Phenol Red broth) محیطی با کربوهیدرات‌های مختلف افزوده شده است که به عنوان محیطی متمایز جهت کمک به تمایز گونه‌ها و جنس‌های مختلف شناخته می‌شود و توانایی تخمیر کربوهیدرات‌های خاص با تولید اسید یا اسید و گاز عمل را دارد.

منبع کربوهیدرات می‌تواند بر اساس نیازهای آزمایش متفاوت باشد. محیط‌های معمولی براث مورد استفاده عبارتند از:

براث فنول رد گلوکز (Phenol Red Glucose Broth)
براث فنول رد لاکتوز (Phenol Red Lactose Broth)
براث مالتوز رد فنول (Phenol Red Maltose Broth)
براث مانیتول رد فنول (Phenol Red Mannitol Broth)
براث فنول رد ساکارز (Phenol Red Sucrose Broth)

هدف از تست تخمیر فنول رد

تعیین واکنش‌های تخمیر کشت خالص میکروارگانیسم‌ها

اصول

تخمیر کربوهیدرات فرآیندی است که میکروارگانیسم‌ها برای تولید انرژی از آن استفاده می‌کنند. اکثر میکروارگانیسم‌ها در طی گلیکولیز، گلوکز را به پیروات تبدیل می‌کنند. با این حال، برخی از موجودات از مسیرهای جایگزین استفاده می‌کنند. یک محیط تخمیر شامل یک محیط پایه حاوی یک کربوهیدرات منفرد (گلوکز، لاکتوز، ساکارز، مانیتول و غیره) برای تخمیر است.

با این حال، محیط کشت ممکن است دارای نشانگرهای رنگی مختلفی باشد. علاوه بر یک نشانگر رنگی برای تشخیص تولید اسید از تخمیر، یک لوله دورهام در هر لوله قرار داده می‌شود تا گاز تولید شده توسط متابولیسم را مهار کند. الگوهای تخمیر کربوهیدرات نشان داده شده توسط ارگانیسم‌های مختلف در تمایز بین گروه‌ها یا گونه‌های باکتری مفید است.

محیط‌های کشت

فنول رد براث یک محیط آزمایش افتراقی همه منظوره است که معمولاً برای افتراق باکتری‌های روده ای گرم منفی استفاده می‌شود.

حاوی پپتون، فنول رد (شاخص pH)، لوله دورهام و یک کربوهیدرات (گلوکز، لاکتوز یا ساکارز) است. فنول رد یک نشانگر PH است که زیر pH 6.8 به رنگ زرد و در pH بالای 7.4 رنگ فوشیا می‌شود.

اگر این ارگانیسم بتواند از کربوهیدرات استفاده کند، یک محصول جانبی اسیدی ایجاد می‌شود که محیط را زرد رنگ می‌کند. اگر ارگانیسم نتواند از کربوهیدرات استفاده کند اما از پپتون استفاده کند، محصول جانبی آمونیاک است که PH محیط را افزایش می‌دهد و آن را به فوشیا تبدیل می‌کند. هنگامی که ارگانیسم قادر به استفاده از کربوهیدرات باشد، ممکن است یک محصول جانبی گازی تولید شود. اگر اینطور باشد، یک حباب هوا در داخل لوله دورهام به دام می‌افتد. اگر ارگانیسم نتواند از کربوهیدرات استفاده کند، گاز تولید نمی‌شود و حباب هوا ایجاد نمی‌شود.

روش تهیه

با استفاده از یک سوزن یا حلقه تلقیح، هر لوله آزمایش را با میکروارگانیسم آزمایش به صورت آسپتیکال تلقیح کنید. روش دیگر، هر لوله آزمایش را با 1-2 قطره از کشت 18 تا 24 ساعته انفوزیون مغز-قلب ارگانیسم مورد نظر تلقیح کنید.
لوله‌ها را در دمای 35-37 درجه سانتیگراد به مدت 18-24 ساعت انکوبه کنید.
تغییرات رنگ یا تشکیل گاز را بررسی کنید.

تفسیر نتیجه در تست تخمیر فنول رد

تولید اسید:

مثبت: پس از انکوباسیون مایع داخل لوله زرد می‌شود (که با تغییر رنگ نشانگر قرمز فنول مشخص می‌شود). این نشان می‌دهد که افت pH به دلیل تولید اسید توسط تخمیر کربوهیدرات (قند) موجود در محیط وجود دارد.
منفی: محیط لوله قرمز باقی می‌ماند و نشان می‌دهد که باکتری نمی‌تواند منبع کربوهیدرات خاصی را که در محیط وجود دارد تخمیر کند

تولید گاز

مثبت: یک حباب (کوچک یا بزرگ بسته به مقدار گاز تولید شده) که در لوله دورهام معکوس دیده می‌شود.
منفی: هیچ حبابی در لوله دورهام معکوس وجود ندارد، یعنی باکتری از تخمیر آن کربوهیدرات خاص موجود در محیط، یعنی ارگانیسم بی هوازی، گاز تولید نمیکند.

موارد استفاده از تست تخمیر فنول رد

تعیین واکنش تخمیر کربوهیدرات‌ها برای تمایز میکروارگانیسم‌ها توصیه می‌شود.
در شناسایی باسیل‌های گرم منفی به ویژه انتروباکتریاسه مفید است.

محدودیت‌های تست تخمیر فنول رد

تست فنول رد براث برای استفاده در تشخیص بیماری یا سایر شرایط در انسان در نظر گرفته نشده است.
به دلیل تنوع غذایی، برخی از سویه‌ها ممکن است با رشد ضعیفی مواجه شوند یا در این محیط رشد نکنند.
افزودن برخی کربوهیدرات‌ها به محیط پایه ممکن است منجر به واکنش اسیدی شود. برای اطمینان از دقت تفسیر، لوله‌های کنترل تلقیح نشده و/یا لوله‌های کنترل پایه براث فنول قرمز تلقیح‌شده باید به موازات آزمایش‌های تخمیر اجرا شوند.

همچنین بخوانید: