تست هیدرولیز لیپید: اصول، روش تست، هدف، محدودیت‌ها

فهرست مطالب نمایش

مقدمه تست هیدرولیز لیپید

لیپیدها ترکیباتی با وزن مولکولی بالا هستند که دارای مقادیر زیادی انرژی هستند. پس از جذب در سلول، آنها از طریق تنفس هوازی برای تولید انرژی سلولی، آدنوزین تری فسفات (ATP) متابولیزه می‌شوند. این اجزا همچنین ممکن است برای سنتز سایر نیازهای پروتوپلاسمی سلولی وارد مسیرهای متابولیکی دیگری شوند.

با این حال، قبل از جذب آنها توسط باکتری‌ها، آنها باید تجزیه شوند. تجزیه لیپیدهایی مانند تری گلیسیریدها توسط آنزیم‌های هیدرولیز خارج سلولی به نام لیپاز (استراز) انجام می‌شود که با افزودن آب پیوندهای استری را در این مولکول می‌شکند و بلوک‌های ساختمانی گلیسرول (یک الکل) و اسیدهای چرب را تشکیل می‌دهند.

اهداف تست هیدرولیز لیپید

1. تعیین توانایی ارگانیسم برای هیدرولیز لیپید.
2. شناسایی باکتری‌هایی که قادر به تولید اگزونزیم لیپاز هستند.

اصول تست هیدرولیز لیپید

در این روش آزمایشی، تریبوتیرین آگار برای نشان دادن فعالیت های هیدرولیتیک اگزونزیم لیپاز استفاده می‌شود.

محیط از ماده مغذی آگار همراه با تری گلیسیرید تریبوتیرین به عنوان سوبسترای لیپیدی تشکیل شده است. تریبوتیرین هنگامی که در آگار پراکنده می‌شود، امولسیون تشکیل می‌دهد و محیطی مات تولید می‌کند که برای مشاهده فعالیت اگزونزیمی ضروری است.

پس از تلقیح و انکوباسیون کشت‌های پلیت آگار، ارگانیسم‌هایی که لیپاز را دفع می‌کنند، ناحیه‌ای از لیپولیز را نشان می‌دهند که با یک ناحیه شفاف اطراف رشد باکتری نشان داده می‌شود. این کاهش کدورت نتیجه واکنش هیدرولیتیکی است که گلیسرول و اسیدهای چرب محلول تولید می‌کند و نشان دهنده یک واکنش مثبت برای هیدرولیز لیپید است.

در غیاب آنزیم‌های لیپولیتیک، محیط مات خود را حفظ می‌کند. این یک واکنش منفی است.

محیط کشت

تریبوتیرین آگار:

هضم پپتیک بافت حیوانی 5.0 گرم در لیتر
عصاره مخمر 3.0 گرم در لیتر
آگار 15.0 گرم در لیتر
pH نهایی (در 25 درجه سانتیگراد) 0.2±7.5

روش

محیط تریبوتیرین آگار را با رگه‌های تک خطی ارگانیسم تلقیح کنید.
محیط را به انكوباتور در دمای 35-37 درجه سانتيگراد به مدت 48-24 ساعت برای بیهوازی‌ها و برای هوازی‌ها صفحه را در دمای 35-37 درجه سانتيگراد به مدت 48-24 ساعت منتقل می‌کنیم.
کشت‌های صفحه تریبوتیرین آگار را از نظر وجود یا عدم وجود یک ناحیه شفاف یا ناحیه لیپولیز که رشد هر یک از ارگانیسم‌ها را احاطه کرده است، بررسی کنید.

نتایج مورد انتظار

بشقاب تریبوتیرین آگار

تست مثبت: تشکیل یک ناحیه شفاف در اطراف رشد باکتری

تست منفی: بدون ناحیه مشخص در اطراف رشد.

کاربردهای تست هیدرولیز لیپید

در شناسایی باکتری‌هایی که لیپاز ترشح می‌کنند، از جمله اعضای انتروباکتریاسه، فوزوباکتریوم، پروپیونی باکتریوم، کلستریدیوم، سودوموناس، مایکوپلاسما، کورینه باکتریوم و استافیلوکوک مفید است.
برای تشخیص و شمارش میکروارگانیسم‌های لیپولیتیک در غذا و سایر مواد.