مقدمه‌ای بر تست پرسیپیتاسیون حلقه
- در قالب آزمایش‌های مختلف، برهم‌کنش‌های آنتی‌بادی‌ها و آنتی‌ژن‌ها برای تعیین وجود یا عدم وجود آنتی‌بادی یا آنتی‌ژن در یک نمونه توسعه داده شده است.
- نوعی برهم‌کنش بین آنتی‌ژن‌های محلول با آنتی‌بادی مخصوص به خود در محیطی مناسب که منجر به تشکیل کمپلکسی غیر قابل حل شده که رسوب می‌کند، واکنش رسوب دهنده نامیده می‌شود.
- تست حلقه یا تست حلقه پرسیپیتین (Precipitin) یک تکنیک سرولوژیکی ساده است که واکنش پرسیپیتین را در محلول نشان می‌دهد.
اهداف تست پرسیپیتاسیون حلقه
- برای شناسایی کمپلکس‌های آنتی‌ژن- آنتی‌بادی.
- شرایطی را توضیح دهد که تحت آن کمپلکس‌های آنتی‌ژن- آنتی‌بادی خارج از داخل محلول رسوب می‌کنند.
- آنتی‌بادی‌هایی را در سرم بیمار شناسایی کند که می‌توانند برای تشخیص بیماری استفاده شوند.
اصول تست پرسیپیتاسیون حلقه
سنجش حلقه پرسیپیتین یک آزمایش کیفی سریع برای شناسایی حضور کمپلکس‌های آنتی‌ژن- آنتی‌بادی بادی است. این تست بر اساس اصول منحنی پرسیپیتین است که بیان می‌کند هنگامی که نسبت مناسبی از آنتی‌ژن به آنتی‌بادی بدست آید، آنتی‌ژن- آنتی‌بادی برهم‌کنش داشته و رسوب اتصال عرضی را تشکیل می‌دهد.
یک محلول حاوی آنتی‌سرم مورد بررسی در قسمت پایینی یک سری از لوله‌های آزمایش شفاف قرار می‌گیرد. محلول‌های حاوی غلظت فزاینده آنتی‌ژن شناخته شده به آرامی به بالای محلول آنتی‌بادی اضافه می‌شود. اگر آنتی‌سرم آزمایشی حاوی آنتی‌بادی‌ای که آنتی‌ژن را تشخیص می‌دهد، باشد، کمپلکس‌های ایمنی تشکیل شده و به صورت حلقه‌ای سفید رنگ در محل اتصال قابل مشاهده خواهند بود.
حلقه سفید نشان دهنده تشکیل رسوب قابل مشاهده، کدورت توده‌ای یا دانه‌ای در مایع آزمایش می‌باشد.
نتایج نیمه کمی را می‌توان با مقایسه نتایج تجربی با نتایج حاصل از یک منحنی استاندارد ساخته شده با استفاده از مقادیر شناخته شده آنتی‌ژن و آنتی‌بادی به دست آورد.
روش تست پرسیپیتاسیون حلقه
- آنتی‌سرم تستی را در لوله آزمایش با قطر کوچک بریزید.
- سپس محلول شفاف آنتی‌ژن آزمایشی به دقت اضافه کنید تا یک لایه بالایی مجزا تشکیل شود. آنتی‌ژن با غلظت‌های مختلف می‌تواند برای لوله‌های بعدی به صورت سری استفاده شود.
- پس از 4 ساعت انکوباسیون، تشکیل یک حلقه رسوب در محل اتصال دو لایه مایع را بررسی کنید.
- سرعت تشکیل حلقه مرئی به غلظت آنتی‌ژن بستگی دارد.
- برای تعیین غلظت (Titer) آنتی‌بادی‌ها می‌توان از رقت‌های مختلف آنتی‌سرم استفاده کرد.
- بالاترین رقت با یک حلقه قابل مشاهده برای تعیین غلظت استفاده می‌شود. غلظت عدد متقابل بالاترین رقتی است که نتیجه مثبت از خود نشان می‌دهد و به صورت یک عدد کامل بیان می‌شود.
تفسیر نتایج تست پرسیپیتاسیون حلقه
نتیجه مثبت:
ایجاد یک حلقه سفید در محل اتصال محلول آنتی‌سرم و آنتی‌ژن نشان دهنده مثبت بودن تست است
نتیجه منفی:
عدم تشکیل حلقه
مثال‌ها
پروتئین واکنشی C (C-reactive protein (CRP))، گروه‌بندی Lancefield از استرپتوکوک‌های بتا همولیتیک (β-haemolytic streptococci) و تست ترموپرسیپیتین Ascoli (Ascoli’s thermoprecipitin test) برای تشخیص سیاه زخم نمونه‌هایی از تست حلقه هستند.
همچنین بخوانید:
- تست CRP (پروتئین واکنشی C): اساس، موارد استفاده، روش و تفسیر نتایج
- تست آفلاتوکسین (Aflatoxin Test): مواد مورد نیاز و روش‌ها
- تست ویدال: مقدمه، اصول، روش استفاده، تفسیر نتایج و محدودیتها
مترجم: صادق حسینی‌کیا
