تست CAMP: اساس، کاربردها، روش و تفسیر نتایج

مقدمه‌ای بر تست CAMP

تست CAMP برای تشخیص گونه Streptococcus agalactiae از سایر گونه‌های استرپتوکوک بتا همولیتیک استفاده می‌شود. این گونه، عضوی از استرپتوکوک‌های گروه B Lancefield، یکی از عوامل ایجاد کننده ورم پستان در گاوها است. CAMP مخفف نام ابداع کنندگان این تست در سال ۱۹۴۴ است. (Christie, Atkinson, Munch, and Peterson)

اساس تست CAMP

ارگانیسم‌های خاصی از جمله استرپتوکوک‌های گروه B ، یک پروتئین همولیتیک خارج سلولی قابل انتشار در برابر حرارت (فاکتور CAMP ) تولید می‌کنند که  هم سو با بتا لیزین استافیلوکوکوس اورئوس عمل می‌کند و باعث افزایش لیز شدن گلبول‌های قرمز خون می‌شود. استرپتوکوک‌های گروه B عمود بر رگه‌ای از استافیلوکوکوس اورئوس در آگار خون گوسفند قرار دارند. یک واکنش مثبت به عنوان یک ناحیه همولیز نوک پیکان در مجاورت محلی که دو خط به هم نزدیک می‌شوند ظاهر می‌شود.

فعالیت همولیتیک بتا همولیزین تولید شده توسط بیشتر سویه‌های استافیلوکوکوس اورئوس توسط پروتئین خارج سلولی تولید شده توسط استرپتوکوک‌های گروه B افزایش می‌یابد. برهم‌کنش بتا همولیزین با این عامل باعث “همولیز سینرژیستیک” می‌شود که به راحتی در پلیت بلاد آگار مشاهده می‌شود. این پدیده در گروه‌های مجزای همولیتیک و غیر همولیتیک استرپتوکوک‌های گروه B دیده می‌شود.

موارد استفاده از تست CAMP

1. برای تشخیص گونه‌های استرپتوکوکوس آگالاکتیه از سایر گونه‌های استرپتوکوک بتا همولیتیک استفاده می‌شود.
2. از آن برای شناسایی لیستریا مونوسیتوژنز استفاده می‌شود که باعث ایجاد یک واکنش CAMP مثبت می‌شود.

مراحل تست CAMP

1. خطی از یک سویه اورئوس تولیدکننده بتا لیزین را در مرکز پلیت بلاد آگار بکشید.
2. طول این رگه استرپتوکوک باید ۳ تا ۴ سانتی‌متر باشد.
3. ارگانیسم‌ها را در عرض صفحه، عمود بر رگه اورئوس در عرض ۲ میلی‌متر به‌صورت خطی بکشید. (ارگانیسم‌های متعدد را می‌توان در یک صفحه آزمایش کرد).
4. در دمای ۳۵-۳۷ درجه سانتی‌گراد در هوای محیط به مدت ۱۸ تا ۲۴ ساعت انکوبه کنید.
5. استرپتوکوک‌های گروه B و چند بتا استرپتوکوک دیگر باعث افزایش فعالیت ß-lysin سویه اورئوس می‌شوند.

تفسیر نتایج تست CAMP

مثبت: همولیز تقویت شده با یک ناحیه پیکان مانند از بتا همولیز در محل اتصال دو ارگانیسم نشان داده می‌شود.

منفی: عدم افزایش همولیز.

کنترل کیفیت تست CAMP

مثبت: استرپتوکوک آگالاکتیه (ATCC13813)_همولیز افزایش‌یافته در ناحیه پیکانی

منفی: استرپتوکوک پیوژنز (ATCC19615)_ بتا همولیز بدون تشکیل ناحیه پیکانی شکل افزایش‌یافته.

محدودیت‌های تست CAMP

1. درصد کمی ازاسترپتوکوک گروه A می‌توانند واکنش CAMP مثبت داشته باشند.
2. برخی از اعضای گروهاسترپتوکوک A می‌توانند تست CAMP مثبت داشته باشند اگر پلیت در جار شمع دار انکوبه شود و یا در شرایط بی‌هوازی نگهداری شود؛ بنابراین باید انکوباسیون در شرایط هوازی باشد.
3. تست باید محدود به کلنی‌هایی با مشخصه مورفولوژی گروه B استرپتوکوکی و ناحیه باریک بتا همولیز روی آگار خون گوسفندی باشند.
4. افزایش زمان انکوباسیون و یا افزایش دمای آن می‌تواند منجر به نتیجه‌یمثبت کاذب گردد.
5. فقط باید از بلاد آگار گوسفندی برای این تست استفاده کرد. در صورت استفاده از پلیت‌هایی با خون انسان، اسب، خرگوش و خوکچه هندی واکنش مناسب دیده نمی‌شود.
6. کلنی‌های لیستریا مونوسیتوژنز (Listeria monocytogenes) ایجاد کننده‌ی یک ناحیه‌ی باریک بتا همولیز روی آگار خون گوسفندی می‌باشد و ممکن است بابتا همولیز استرپتوکوکی گروه B اشتباه گرفته شود در صورتی که رنگ آمیزی گرم و تست کاتالاز به کار گرفته نشود.

مطالعه بیشتر:

تست لیپاز (Lipase): اصول، روش، موارد استفاده و تفسیر

تست ایندول (Indole): اصول، شناساگر‌ها، روش، تفسیر نتایج و محدودیت‌ها

منبع

مترجم: مریم محجوب