تست MUG: هدف، اصول، روش، نتیجه و محدودیت‌ها

فهرست مطالب نمایش

هدف تست MUG

شناسایی دسته‌های مختلف انتروباکتریاسه (Enterobacteriaceae) و اشریشیا کلی (Escherichia coli) مولد وروتوکسین (Verotoxin).

اصول تست MUG

MUG مخفف 4-methylumbelliferyl-beta-D-glucuronide (4-متیل‌لومبلیفریل-بتا-دی-گلوکورونید)، یک سوبسترای فلوروژنیک (Fluorogenic) مربوط به β-گلوکورونیداز (β-glucuronidase) است. β-D-گلوکورونیداز آنزیمی است که توسط اکثر سویه‌های E. coli و دیگر انتروباکتریاسه‌ها تولید می‌شود و مشتقات β-d-گلوکوپیرانوسید-اورونیک (β-d-glucopyranosid-uronic) را به آگلیکون‌ها (Aglycon) و d-گلوکورونیک اسید (d-glucuronic acid) هیدرولیز می‌کند.

در این تست، دیسک MUG به سوبسترای 4-متیل‌لومبلیفریل-بتا-دی-گلوکورونید آغشته شده است. ارگانیسمی که قادر به تولید آنزیم β-D- گلوکورونیداز است، این توانایی را دارد که سوبسترای 4- متیلومبلیفریل- β-D- گلوکورونید را بشکند و در نتیجه یک نیمه فلورسنت 4-متیلومبلیفریل (4-MU) تولید کند.

محصول نهایی هیدرولیز (4-متیلومبلیفریل (4-MU)) تحت نور فرابنفش با طول موج بلند، به رنگ آبی فلورسانس در می‌آید. با این حال سویه‌های تولیدکننده وروتوکسین E. coli، MUG تولید نمی‌کنند و نتیجه آزمایش منفی ممکن است وجود یک سویه مهم بالینی را نشان دهد. فلورسانس 4-MU تحت نور فرابنفش و بسته به pH با حداکثر طول موج 320 نانومتری در pH پایین (1.97 تا 6.72) و360 نانومتری در pH بالا (7.12 تا 10.3) بررسی می‌شود.

روش تست MUG

تست دیسک مستقیم

یک دیسک MUG را در یک ظرف پتری خالی استریل قرار داده و یک قطره آب دمینرال شده به آن اضافه کنید.
2 تا 3 کلنی ایزوله شده از یک کشت 18 تا 24 ساعته را روی دیسک بمالید.
یک تکه کاغذ صافی اشباع شده با آب را در درب ظرف پتری قرار دهید تا محیطی مرطوب فراهم شود.
ظرف را در دمای 35 تا 37 درجه سانتی‌گراد تا 30 دقیقه به صورت هوازی انکوبه کنید.
پس از انکوباسیون، با استفاده از نور فرابنفش موج بلند (360 نانومتر) در یک اتاق تاریک، دیسک را از نظر فلورسانس بررسی کنید.

تست لوله آزمایش

25 میلی‌لیتر آب دمینرال شده را به یک لوله شیشه‌ای تمیز اضافه کنید.
یک سوسپانسیون سنگین با 3 تا 4 کلنی از ایزوله مورد آزمایش، در لوله ایجاد کنید.
با استفاده از فورسپ (Forcep)، یک دیسک MUG را در لوله آزمایش قرار داده و به شدت تکان دهید تا از شستشوی کافی سوبسترا در مایع داخل لوله، اطمینان حاصل کنید.
لوله را در دمای 35 تا 37 درجه سانتی‌گراد تا 1 ساعت، به صورت هوازی انکوبه کنید.
پس از انکوباسیون، با استفاده از نور فرابنفش موج بلند (360 نانومتر) در یک اتاق تاریک، دیسک را از نظر فلورسانس بررسی کنید.

تفسیر نتایج تست MUG

تست مثبت: فلورسانس آبی

تست منفی: بدون فلورسانس

محدودیت‌های تست MUG

این تست تنها بخشی از طرح کلی برای شناسایی coli است. برای شناسایی قطعی آزمایشات بیوشیمیایی و سرولوژیکی بیشتری لازم است.
اکثر سویه‎‌های coli 0157:H7، MUG منفی هستند. استفاده از تست آگلوتیناسیون لاتکس (Latex agglutination) E. coli 0157:H7 همراه با تست MUG برای شناسایی سریع ایزوله‌ها در هنگام شیوع این باکتری توصیه می‌شود.
برخی از سویه‌های شیگلا (Shigella)، MUG مثبت هستند. آزمایش سرولوژی ممکن است برای افتراق شیگلا و coli مورد نیاز باشد.
واکنش‌های منفی کاذب ممکن است هنگام استفاده از کلونی‌های آزمایشی که از محیط‌های حاوی رنگ (EMB، MAC) ایزوله شده‌اند، گزارش شود و و از این رو می‌تواند تفسیر را دشوار کند.
ارگانیسم‌هایی غیر از coli مانند سالمونلا (Salmonella)، شیگلا، استافیلوکوک (Staphylococcus) و استرپتوکوک (Streptococcus) دارای آنزیم β-گلوکورونیداز بوده و MUG مثبت هستند. تنها تست باکتری‌های میله‌ای شکل لاکتوز مثبت و گرم منفی از نظر فعالیت β-گلوکورونیداز به جلوگیری از شناسایی نادرست ارگانیسم‌های دیگر به عنوان E. coli کمک می‌کند.