مقدمه‌ای بر تکنیک ترانسفکشن سلولی
ترانسفکشن عبارت است از ورود هرگونه مولکول اسید نوکلئیک به وسیله غیر ویروسی به سلولهای یوکاریوتی کشت داده شده. در گذشته، اغلب فقط از DNA استفاده می شد، اما اخیرا از RNA نیز برای ترانسفکشن سلولی استفاده می شود.
اگرچه روش های بسیاری برای انتقال ژن به سلول ها وجود دارد ، اما سه روش بسیار شناخته شده امروزه توسط محققان وجود دارد:
- مواد شیمیایی
- الکتروپورشن (انتقال دهنده ژن)
- انتقال ویروسی
هدف نهایی این فرآیند، ارائه اسیدهای نوکلئیک به سلولها برای بررسی عملکرد ژن با بیان آن یا از طریق حذفی ژنهای درون زا است. دستکاری بیان ژن یک تکنیک اصلی در زمینه های تحقیقاتی از جمله توسعه دارو، تحقیقات سرطان، ژن درمانی و مهندسی بافت است.
پروتکل (پلیت 10 سانتی متر):
- محیط کشت مناسبی با 10% FBS و بدون آنتی بیوتیک آماده کنید.
- محیط رویی سلو ها را خارج کنید.
- 2-3 میلی لیتر PBS را برای شستشو اضافه کنید.
- PBS را خارج کنید.
- 8 میلی لیتر از محیط کشت آماده شده را به پلیت اضافه کنید.
- 30 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد و در زیر هود انکوبه کنید.
تیوب 1: DNA مورد نظر در 100 میکرولیتر محیط کشت بریزید.
تیوب 2: لیپوفکتامین 2000 را به همراه 100 میکرولیتر بریزید.
5 دقبقه در زیر هود انکوبه کنید.
- دو تیوب را به آرامی مخلوط کنید.
- انکوباسیون در انکوباتور 37 درجه به مدت 30 دقیقه.
- مخلوط دو تیوب را بر روی سلول ها بریزید.
- پس از مخلوط کردن کامل آن با محیط کشت روی سلول ها، پلیت را به انکوباتور انتقال داده و 6 ساعت انکوبه کنید.
- حالا محیط رویی را خارج کرده و به پلیت محیط کشت مناسب اضافه کنید.
مطالب مرتبط با تکنیک ترانسفکشن سلولی:
