تکنیک شمارش سلولی و زنده مانی

شمارش سلول به هر روشی (لام هموسیتومتر یا دستگاه cell counter) که برای شمارش یا اندازه گیری تعداد سلول ها باشد،گفته می شود که در علوم زیستی از جمله تشخیص های پزشکی و درمانی مورد استفاده است. شمارش سلول زیر مجموعه مهم فلوسیتومتری بوده و کاربردهای آن در آزمایشگاه های تحقیقاتی و کلینیکال می باشد.

آماده سازی لام هموسیتومتر

در صورت استفاده از هموسیتومتر شیشه ای پوشش آن باید قبل از استفاده با الکل تمیز شود.
در صورت استفاده از هموسیتومتر یکبار مصرف (به عنوان مثال INCYTO DHC-N01) ، قبل از استفاده به سادگی از بسته خارج شده استفاده کنید.

آماده سازی سوسپانسیون سلولی

تکنیک های ضدعفونی کننده از آلودگی محیط کشت سلولی و معرف ها توسط میکروارگانیسم ها جلوگیری می کند.

فلاسک را به آرامی تکان دهید تا اطمینان حاصل شود که سلولها به طور مساوی توزیع شده اند.
قبل از اینکه سلول ها شانس چسبیدن داشته باشند، با استفاده از یک پیپت استریل سوسپانسیون سلولی را خارج و به یک لوله Eppendorf انتقال دهید.
3. 10 میکرولیتر از سلول را درون یک تیوب جدید ریخته و 10 میکرولیتر 0.4٪ Trypan Blue به آن اضافه کنید و به آرامی مخلوط کنید.

شمارش

با استفاده از پیپت، 10 میکرولیتر سوسپانسیون سلولی تحت Trypan Blue را به حد فاصل بین لامل و لام انتقال دهید. در صورت استفاده از هموسیتومتر شیشه ای، هر دو اتاق را به آرامی در زیر لامل آن پر کنید، اجازه دهید که با عمل مویرگی تمام سطح زیرین را پر کند.
با استفاده از میکروسکوپ، روی خطوط شبکه هموسیتومتر با بزرگ نمایی 10 برابر زوم کنید.
با استفاده از پیچ تنظیم ماکرو و میکرو، سلولهای زنده و غیرقابل استفاده در یک مجموعه از 16 مربع را بشمارید. هنگام شمارش، سیستمی را به کار گیرید که سلول ها فقط وقتی در یک مربع یا در خط راست یا پایین مرز قرار دارند شمارش شوند.
پس از خواندن 16 مربع ناحیه 1، 16 خانه از ناحیه های بعدی را نیز بخوانید.
سلول های زنده دارای دبواره ای رنگ شده با Trypan Blue هستند ولی سلول های مرده یا تکه تکه اند یا رنگ آبی به سیتوپلاسمشان نفوذ کرده.

زنده مانی

برای محاسبه ی تعداد سلول ها (1ml):