مقدمه‌ای بر تکنیک فریز سلولی
رده های سلولی در کشت دائمی احتمالاً از نتایج نامطلوب مانند رانش ژنتیکی، پیری و آلودگی میکروبی رنج می برند و حتی آزمایشگاه هایی با بهترین عملکرد نیز نمی توانند از این مسائل جلوگیری کنند. رده سلولی مستقر یک منبع با ارزش است و جایگزینی آن گران و پرهزینه است. بنابراین، بسیار حیاتی است که آنها را فریز و به مدت طولانی حفظ کرد. بانک مناسب سلولهای یخ زده بخش مهمی از آزمایگاه موفق کشت سلولی است.
روش انجماد عمومی برای سلولهای چسبنده و معلق یکسان است، با این تفاوت که سلولهای چسبنده قبل از شروع انجماد باید از کف فلاسک کشت جدا شوند. بهترین روش برای محافظت از انجماد سلولهای كشت شده، ذخیره آنها در بخار نیتروژن مایع در محیط كامل و با حضور ماده محافظت كننده ای مانند دی متیل سولفوكسید (DMSO) است.
عوامل محافظت کننده انجماد باعث کاهش دمای انجماد محیط می شوند و خطر تشکیل کریستال یخ را تا حد زیادی کاهش می دهد که می تواند به سلول ها آسیب برساند و باعث مرگ سلول شود.
محیط انجماد
همیشه از محیط انجماد توصیه شده برای محافظت از سلول های خود استفاده کنید. محیط انجماد باید حاوی ماده محافظتی مانند DMSO یا گلیسرول باشد.
مواد و تجهیزات مورد نیاز
- ظروف کشت حاوی سلولهای کشت داده شده در مرحله رشد
- محیط رشد كامل
- ماده محافظت کننده مانند DMSO
- لوله فالکون یکبار مصرف، استریل 15 میلی لیتری یا 50 میلی لیتری
- معرفها و تجهیزات برای تعیین تعداد سلولهای زنده
- کرایوویال
- تانک ازت
- Trypsin (برای سلول های چسبنده)
- فریزر 80-
پروتکل تکنیک فریز سلولی
- مواد انجماد را آماده کرده و در دمای 2 تا 8 درجه سانتیگراد تا زمان استفاده نگهداری کنید. توجه داشته باشید که محیط انجماد مناسب به سلول بستگی دارد.
- برای رده های چسبنده، با تریپسین سلول ها را از کف جدا کرده سپس با محیط کشت کامل، تریپسین را خنثی و معلق کنید.
- تعداد کل سلول ها و درصد زنده ماندن را با استفاده از لام هموسیتومتر، شمارنده سلول و Trypan Blue تعیین کنید. با توجه به تراکم سلولی قابل استفاده، حجم مورد نیاز محیط انجماد را محاسبه کنید.
- برای 5 تا 10 دقیقه محیط معلق حاوی سلول را در 1500 دور در دقیقه ساتریفیوژ کنید کنید. سپس بدون ایجاد مزاحمت برای پلت سلولی محیط رویی را خارج کنید.
- پلیت سلولی را در محیط فریز سرد مناسب معلق کنید.
- پس از انجام پیپتاژ، مخلوط همگن را به کرایوویال انتقال دهید.
- سلول ها را 1 ساعت در فریزر 20-، سپس یک روز در فریزر 80- و بعد از آن به تانک ازت انتقال دهید.
برای مطالعه سایر تکنیک آزمایشگاهی کلیک کنید.
برای مشاهده و ثبت نام دوره کارآموزی کشت سلولی اینجا کلیک کنید
برای سفارش خدمات به آزمایشگاه کشت سلول ژنیران اینجا کلیک کنید
