تکنیک ها
تکنیک ARMS PCR
تکنیک ARMS PCR
سیستم جهشی مقاوم به تکثیر (ARMS) کاربردی از PCR است که در آن DNA توسط آغازگرهای اختصاصی آلل تقویت می شود. DNA پلیمرازهایی با قدرت چسبندگی بالا که این فعالیت را دارند ، در ARMS قابل استفاده نیستند. این یک روش بسیار مفید برای شناسایی جهش نقطه یا چندشکلی است.
از آنجا که ARMS PCR بیشتر برای شناسایی یک جهش یا چندشکلی انجام می شود، بسیار مهم است که بتوان توسط آن DNA هوموزیگوت یا هتروزیگوت را تشخیص داد. هتروزیگوت یا همزیگوت با استفاده از آغازگرهای ARMS برای آللهای جهش یافته / پلی مورفیک و نرمال (نوع وحشی) متفاوت است. واکنش ها برای تشخیص جهش و آللهای معمولی معمولاً در لوله های جداگانه انجام می شود. اما می توان با استفاده از برچسب زدن دو پرایمر با رنگهای مختلف فلورسنت در همان لوله انجام شود.
انواع ARMS پی سی آر
- ARMS PCR استاندارد
- تکنیک Multiplex ARMS PCR
- تکنیک Double ARMS
پروتکل ARMS PCR
برای توصیف ویژگی های SNP توسط ARMS-PCR، از هر چهار آغازگر طراحی شده برای هر SNP (single nucleotide polymorphism) استفاده می شود. در حالی که آغازگرهای بیرونی به عنوان یک کنترل داخلی برای یکپارچگی DNA عمل می کنند، دو آغازگر داخلی قطعات DNA را با طول های مختلف، که مخصوص آن دو آللی بود که باید مقایسه می شدند، هدف قرار می دهند. حجم واکنش 10 میکرولیتر در این واکنش PCR برای نتایج واضح کافی است. مقدار DNA ژنومی و آغازگرها و همچنین دمای حرارت باید برای هر SNP بهینه شود. PCR معمولی با دناتوراسیون اولیه در 95 درجه سانتیگراد به مدت 2 دقیقه آغاز می شود و پس از آن 40 چرخه دناتوراسیون (95 درجه سانتیگراد ، 15 ثانیه)، حرارت دهی (بسته به نوع هر آغازگر، 15 ثانیه) و طویل شدن (72 درجه سانتیگراد ، 15 ثانیه). واکنش با یک مرحله طویل شدن نهایی 72 درجه سانتیگراد به مدت 10 دقیقه پایان می یابد.
آشنایی با تکنیک های آزمایشگاهی
