رنگ آمیزی کالکوفلور سفید: اصول، روش، نتایج و کاربرد

فهرست مطالب نمایش

رنگ آمیزی کالکوفلور سفید (Calcofluor White Staining) چیست؟

کالکوفلور سفید یک رنگ آبی فلورسنت شیمیایی است که به طور غیر اختصاصی برای اتصال به پلیمرهای پلی‌ساکارید (Polysaccharide) مرتبط با بتای کیست‌های آمیب (Amoebic cyst) استفاده می‌شود.
قابلیت آن، توانایی اتصال به پلی‌ساکاریدهای بتا 3-1 و بتا 4-1 در کیتین (Chitin) و سلولز (Cellulose) است که در دیواره سلولی قارچ‌ها، گیاهان و جلبک‌ها وجود دارد.
این روش به دلیل سرعت در بررسی سلول‌ها، جایگزین روش رنگ آمیزی با هیدروکسید پتاسیم (Potassium Hydroxide (KOH)) شد.

اهداف رنگ آمیزی کالکوفلور سفید

برای رنگ آمیزی عوامل قارچی و انگلی
برای مشاهده وجود عوامل قارچی و انگلی در زیر میکروسکوپ فلورسنت

اصل رنگ آمیزی کالکوفلور سفید

از روش رنگ آمیزی کالکوفلور سفید به‌عنوان یک رنگ تطبیقی به ویژه برای شناسایی عفونت قارچی اونیکومایکوز (Onychomycosis) استفاده می‌شود.
ساختارهای حاوی کیتین زیر نور فرابنفش در میکروسکوپ فلورسنت به رنگ سفید درخشان، فلورسان می‌شوند.
رنگ کالکوفلور سفید به عنوان یک فلوروکروم (Fluorochrome) غیر اختصاصی که به دیواره کیتین و سلولوز متصل می‌شود، به عنوان سریع‌ترین روش شناسایی قارچ‌ها و مخمرهای بیماری‌زا مانند پنوموسیستیس کارینی (Pneumocystis carinii)، میکروسپوریدیوم (Microsporidium)، آکانتامبا (Acanthamoeba)، ناگلریا (Naegleria) و گونه‌های بالاموتیا (Balamuthia)، شناخته شده است.
رنگ کالکوفلور سفید هنگامی که با هیدروکسید پتاسیم مخلوط می‌شود، به خوبی عوامل قارچی را نمایان می‌کند.
ضد رنگ (Counterstain) مورد استفاده در این روش، رنگ Evans است که پس‌زمینه تیره‌ای را تشکیل می‌دهد و بافت‌ها و سلول‌ها را قادر می‌سازد با استفاده از القا با نور آبی و نه اشعه ماوراء بنفش، فلورسانس کنند.
عوامل دیگر، رنگ قرمز مایل به نارنجی فلورسانس می‌کنند در حالی که عوامل قارچی و انگلی به رنگ سبز مایل به زرد درخشان فلورسانس می‌نمایند.

شناساگرها

رنگ کالکوفلور سفید
هیدروکسید پتاسیم

روش رنگ آمیزی کالکوفلور سفید

نمونه را با دقت روی یک لام شیشه‌ای تمیز قرار دهید.
برای ایجاد یک فلورسانس شدید، یک قطره از رنگ آمیزی کالکوفلور سفید را اضافه کنید.
یک قطره هیدروکسید پتاسیم 10% اضافه کنید.
نمونه را با یک لامل بپوشانید و بگذارید برای 1 دقیقه بماند تا رنگ را جذب کند.
رنگ اضافی را با یک حوله کاغذی خشک با فشار ملایم روی لکه پاک کنید.
رنگ را زیر پرتوهای فرابنفش با بزرگنمایی 100 تا 400 برابر مشاهده کنید.

نتایج

قارچ‌ها، کیست‌های پنوموسیستیس، و انگل‌ها در زیر میکروسکوپ فلورسنت فرابنفش، به رنگ سبز مایل به زرد درخشان به نظر می‌رسند.

a: رنگ آمیزی فلورسنت مخمر با کالکوفلور سفید؛ یک رنگ آبی روشن بر روی دیواره‌های سلولی مخمر نشان می‌دهد. b: سرخس عقابی (Eagle Fern) فلورسانس سبز روشن و آبی روشن را در رنگ آمیزی کالکوفلور سفید نشان می‌دهد

تفسیر

محلول‌های آب‌دار کالکوفلور سفید، فلورسانس را در محدوده طول موج 300 تا 412 نانومتر (با حداکثر جذب در 347 نانومتر) جذب می‌کنند. حداکثر القا و فلورسانس با نور فرابنفش اتفاق می‌افتد، اگرچه القا با نور بنفش یا آبی-بنفش نیز نتایج خوبی به همراه دارد. بافت‌ها فلورسانس پس‌زمینه زرد مایل به سبز را نشان می‌دهند که در قارچ‌ها و انگل‌ها شدیدتر و قابل مشاهده‌تر هستند.

کاربردهای رنگ آمیزی کالکوفلور سفید

رنگ آمیزی کالکوفلور سفید را می‌توان در قارچ‌شناسی و انگل‌شناسی بالینی جهت:

نشان دادن حضور انگل‌های آمیب با شناسایی کیست‌های آن‌ها.
رنگ آمیزی اسکار جوانه‌های سلول‌های مخمر با محتوای بیشتر کیتین که امکان تعیین کمیت اسکار جوانه‌ها (که نشان‌دهنده سن سلول است) را فراهم می‌کند.

استفاده کرد.

رنگ آمیزی کالکوفلور سفید همچنین برای تقویت پاسخ مخمرها در پاپ اسمیر با رنگ پاپانیکولائو (Papanicolaou) استفاده می‌شود.
این روش برای رنگ آمیزی پنوموسیستیس (Pneumocystis)، میکروسپوریدیا (Microsporidia)، کریپتوسپوریدیوم (Cryptosporidium) و برخی کیست‌های انگلی که کالکوفلور مثبت هستند، استفاده می‌شود.
جهت تشخیص قارچ کاندیدا (Candida) در ضایعات سرطانی و پیش سرطانی در زیر میکروسکوپ فلورسنت، از رنگ آمیزی کالکوفلور سفید استفاده می‌شود.
کالکوفلور همچنین به عنوان رنگ در لباس‌های سفید استفاده می‌شود و یک ظاهر مشکی ایجاد می‌کند.
کالکوفلور یک رنگ روشن کننده پارچه است که قابل حل در آب و بی‌رنگ می‌باشد. از این رو به عنوان سفیدکننده پارچه به مواد شوینده اضافه می‌شود.

مزایا

این روش یک راه سریع و آسان برای تشخیص در سیتوپاتولوژی (Cytopathology) و هیستوپاتولوژی (Histopathology) است
برای رنگ آمیزی موثر به شناساگر خاصی نیاز ندارد.