دسته‌بندی نشده
فیکساسیون – انواع فیکساتورها
فیکساتورها
هدف از تثبیت حفظ دائمی بافت ها در حالتی است که تا حد امکان زندگی می کنند. تثبیت باید در اسرع وقت پس از برداشتن بافت ها (در مورد آسیب شناسی جراحی) یا بلافاصله پس از مرگ (با کالبد شکافی) انجام شود تا از اتولیز جلوگیری شود. هیچ تثبیت کننده کاملی وجود ندارد، اگرچه فرمالدئید نزدیکترین است. بنابراین، بسته به نوع بافت موجود و ویژگی هایی که باید نشان داده شود، انواع فیکساتورها برای استفاده در دسترس هستند.
پنج گروه اصلی از فیکساتورها وجود دارد که بر اساس مکانیسم اثر طبقه بندی می شوند:
آلدهیدها
جیوه ها
الکل ها
عوامل اکسید کننده
پیکراتس
آلدهیدها شامل فرمالدئید (فرمالین) و گلوتارآلدئید هستند. بافت توسط پیوندهای متقابل ایجاد شده در پروتئین ها، به ویژه بین باقی مانده های لیزین، ثابت می شود. این پیوند متقابل آسیب زیادی به ساختار پروتئین ها وارد نمی کند، به طوری که آنتی ژن از بین نمی رود. بنابراین، فرمالدئید برای تکنیک های ایمونوهیستوشیمی مناسب است. فرمالین به خوبی به بافت نفوذ می کند، اما نسبتا کند است. محلول استاندارد فرمالین بافر خنثی 10 درصد است. یک بافر از اسیدیته جلوگیری می کند که باعث اتولیز می شود و باعث رسوب رنگدانه فرمول-هم در بافت ها می شود.
گلوتارآلدئید باعث تغییر شکل ساختار آلفا-مارپیچ در پروتئین ها می شود، بنابراین برای رنگ آمیزی ایمونوهیستوشیمی مناسب نیست. با این حال، خیلی سریع ثابت می شود، بنابراین برای میکروسکوپ الکترونی خوب است. بسیار ضعیف نفوذ می کند، اما بهترین جزئیات سیتوپلاسمی و هسته ای را ارائه می دهد. محلول استاندارد یک گلوتارآلدئید بافر 2 درصد است
جیوه ها با مکانیسمی ناشناخته بافت را ثابت می کنند. آنها حاوی کلرید جیوه هستند و شامل تثبیت کننده های معروفی مانند B-5 و Zenker’s هستند. این فیکساتورها نسبتا ضعیف نفوذ می کنند و باعث سختی بافت می شوند، اما سریع هستند و جزئیات هسته ای عالی را ارائه می دهند. بهترین کاربرد آنها برای تثبیت بافت های خونساز و رتیکولواندوتلیال است. از آنجایی که آنها حاوی جیوه هستند، باید با دقت دفع شود
الکل ها از جمله متیل الکل (متانول) و الکل اتیلیک (اتانول)، دناتوره کننده پروتئین هستند و به طور معمول برای بافت ها استفاده نمی شوند زیرا باعث شکنندگی و سختی بیش از حد می شوند. با این حال، آنها برای اسمیر سیتولوژیک بسیار خوب هستند زیرا به سرعت عمل می کنند و جزئیات هسته ای خوبی ارائه می دهند. قوطی های اسپری تثبیت کننده های الکل برای پزشکانی که اسمیر PAP را انجام می دهند به بازار عرضه می شود، اما اسپری های موی ارزان نیز به همین خوبی عمل می کنند.
عوامل اکسید کننده عبارتند از تثبیت کننده های پرمنگنات (پرمنگنات پتاسیم)، تثبیت کننده های دی کرومات (دی کرومات پتاسیم) و تتروکسید اسمیم. آنها پروتئین ها را به هم متصل می کنند، اما باعث دناتوره شدن گسترده می شوند. برخی از آنها کاربردهای تخصصی دارند، اما بسیار کم استفاده می شوند.
پیکرات ها شامل فیکساتورها با اسید پیکریک است. مهمترین آنها راه حل Bouin است. مکانیسم اثر ناشناخته ای دارد. تقریباً به خوبی جیوه ها با جزئیات هسته ای عمل می کند، اما سختی زیادی ایجاد نمی کند. اسید پیکریک در شکل خشک خطر انفجار است. به عنوان یک محلول، هر چیزی را که لمس می کند، از جمله پوست زرد می کند.
تثبیت – عوامل مؤثر بر فیکساسیون
تعدادی از عوامل وجود دارد که بر روند تثبیت تأثیر می گذارد:
بافر کردن
نفوذ
جلد
درجه حرارت
تمرکز
فاصله زمانی
تثبیت بهتر است نزدیک به pH خنثی، در محدوده 6-8 انجام شود. هیپوکسی بافت ها pH را کاهش می دهد، بنابراین باید ظرفیت بافری در فیکساتور وجود داشته باشد تا از اسیدیته بیش از حد جلوگیری شود. اسیدیته باعث تشکیل رنگدانه فرمالین-هم می شود که به صورت رسوبات پلاریزه شدنی سیاه رنگ در بافت ظاهر می شود. بافرهای رایج عبارتند از فسفات، بی کربنات، کاکودیلات و ورونال. فرمالین تجاری با فسفات در pH 7 بافر می شود.
نفوذ بافت ها بستگی به قابلیت انتشار هر فیکساتور دارد که ثابت است. فرمالین و الکل به بهترین وجه و گلوتارآلدئید بدترین نفوذ را دارند. مرکوریال ها و دیگران جایی در این بین هستند. یکی از راه های رفع این مشکل، برش دادن بافت ها به صورت نازک (2 تا 3 میلی متر) است. نفوذ به یک بخش نازک سریعتر از یک بخش ضخیم اتفاق می افتد.
حجم فیکساتور مهم است. نسبت فیکساتور به بافت باید 10:1 باشد. بدیهی است که ما اغلب با کمتر از این فاصله می گیریم، اما ممکن است تثبیت ایده آل نداشته باشیم. یکی از راه‌های حل جزئی مشکل، تعویض فیکساتور در فواصل زمانی است تا از فرسودگی فیکساتور جلوگیری شود. هم زدن نمونه در فیکساتور نیز باعث افزایش تثبیت می شود.
افزایش دما، مانند تمام واکنش های شیمیایی، تا زمانی که دستمال را نپزید، سرعت تثبیت را افزایش می دهد. فرمالین داغ بافت‌ها را سریعتر ثابت می‌کند، و این اغلب اولین قدم در یک پردازشگر بافت خودکار است.
غلظت فیکساتور باید به پایین ترین حد ممکن تنظیم شود، زیرا هزینه کمتری برای فیکساتور خرج خواهید کرد. فرمالین در 10% بهترین است. گلوتارآلدئید به طور کلی در 0.25٪ تا 4٪ ساخته شده است. غلظت بیش از حد بالا ممکن است بر بافت ها تأثیر منفی بگذارد و مصنوعاتی شبیه گرمای بیش از حد ایجاد کند.
همچنین فاصله زمانی از برداشتن بافت ها تا تثبیت بسیار مهم است. هر چه سریعتر بتوانید دستمال کاغذی را بگیرید و آن را تعمیر کنید، بهتر است. مصنوعات با خشک کردن معرفی می شوند، بنابراین اگر بافت کنار گذاشته شد، لطفاً آن را با نمک مرطوب نگه دارید. هر چه بیشتر منتظر بمانید، اندامک های سلولی بیشتری از بین می روند و انقباض هسته ای و کلوخه شدن مصنوعی بیشتری رخ می دهد.
ثابت کننده ها – استفاده عمومی
بر اساس ماهیت فیکساتورها، نوع بافت و جزئیات بافت شناسی که باید نشان داده شود، استفاده های متداول از فیکساتورها در آزمایشگاه پاتولوژی وجود دارد.
فرمالین برای تمام پاتولوژی های معمول جراحی و بافت های کالبد شکافی زمانی که قرار است اسلاید H و E تولید شود استفاده می شود. زمانی که شرایط ایده آل نباشد، فرمالین بخشنده ترین فیکساتور است و هیچ بافتی وجود ندارد که آسیب قابل توجهی به آن وارد کند. اکثر پزشکان و پرستاران می توانند درک کنند که فرمالین چیست و چه کار می کند و بوی بد آن به اندازه ای است که با دقت با آن برخورد می کنند.
فیکساتورهای زنکر برای بافت های رتیکولواندوتلیال از جمله غدد لنفاوی، طحال، تیموس و مغز استخوان توصیه می شود. Zenker به خوبی هسته ها را ثابت می کند و جزئیات خوبی ارائه می دهد. با این حال، رسوبات جیوه باید قبل از لکه برداری حذف شوند (دزنکریزاسیون) شوند، در غیر این صورت رسوبات سیاه باعث ایجاد برش می شوند.
محلول Bouin گاهی اوقات برای تثبیت بیضه، دستگاه گوارش و بافت غدد درون ریز توصیه می شود. روی بافت های خونساز هم تاثیر بدی ندارد و قبل از رنگ آمیزی نیازی به دزنکریزاسیون ندارد.
گلوتارآلدئید برای تثبیت بافت ها برای میکروسکوپ الکترونی توصیه می شود. گلوتارآلدئید باید سرد و بافر باشد و بیش از 3 ماه عمر نداشته باشد. بافت باید تا حد امکان تازه باشد و ترجیحاً در داخل گلوتارآلدئید با ضخامت بیش از 1 میلی متر برش داده شود تا تثبیت افزایش یابد.
الکل ها، به ویژه اتانول، عمدتا برای اسمیر سیتولوژیک استفاده می شود. اتانول (95%) سریع و ارزان است. از آنجایی که اسمیرها فقط یک سلول یا بیشتر ضخیم هستند، مشکل بزرگی از انقباض وجود ندارد و از آنجایی که اسمیر برش داده نمی شود، شکنندگی ناشی از آن مشکلی ندارد.
برای تعمیر بخش های یخ زده، می توانید تقریباً از هر چیزی استفاده کنید – اگرچه متانول و اتانول بهترین هستند.
مطالعات بیشتر در بخش راهنمای علمی سایت
