ابزار و وسایل آزمایشگاهی شامل، محلول ها کیت ها, ویکی ژن
آلکالین پپتون واتر (Alkaline Peptone Water): ترکیب، اصول، روش آماده‌سازی، نتایج، موارد استفاده
مقدمه‌ای بر محیط کشت آلکالین پپتون واتر
آلکالین پپتون واتر یک محیط کشت براث (Broth) برای غنی‌سازی باکتری‌های گونه ویبریو (Vibrio) در غذا، آب و نمونه‌های بالینی است. Shread و همکاران آب پپتون را برای استفاده به عنوان یک براث غنی‌کننده غیرانتخابی برای کشت انتروباکتریاسه (Enterobacteriaceae) از مواد غذایی و سایر نمونه‌ها، فرموله کردند.
این براث با تغییر PH آب پپتون به 8.4 به دست می‌آید. PH قلیایی این محیط باعث رشد ارگانیسم‌های ویبریو شده و در عین حال مانع از رشد باکتری‌های کومنسال (Commensal) روده می‌شود. نشان داده شده است که غنی‌سازی نمونه‌ها در آلکالین پپتون واتر قبل از تلقیح محیط‌های کشت پلیت (Plate)، نرخ بازیابی گونه‌های ویبریو را افزایش می‌دهد.
ترکیبات آلکالین پپتون واتر
| مواد تشکیل دهنده | گرم در لیتر |
| پپتون | 10 |
| کلرید سدیم (Sodium Chloride) | 20 |
pH نهایی (در 25 درجه سانتی‌گراد): 0.2 ± 8.6
اصول آلکالین پپتون واتر
- روش‌های مختلفی برای جداسازی گونه‌های ویبریو از نمونه‌های محیطی، غذایی و بالینی وجود دارد.
- این روش‌ها به طور کلی شامل یک مرحله پیش‌غنی‌سازی و به دنبال آن کشت یک محیط جامد در پلیت و شناسایی مورفولوژیکی (Morphological)، بیوشیمیایی (Biochemical) و سرولوژیکی (Serological) می‌باشد.
- از محیط آلکالین پپتون واتر می‌توان برای کشت موثر گونه‌های ویبریو استفاده کرد. برای این منظور یک محیط کشت براث غنی‌کننده مناسب است.
- کلرید سدیم 2 درصد وزنی – حجمی (w/v) موجود در این محیط رشد ویبریو کلرا (Vibrio cholerae) را تقویت می‌کند، در حالی که قلیایی بودن این محیط، رشد بیشتر باکتری‌های فلورا (flora) ناخواسته موجود را مهار می‌کند.
- پپتون منبع نیتروژن و کربن، آمینو اسیدهای زنجیره بلند، ویتامین‌ها و سایر مواد مغذی ضروری را فراهم می‌کند. کلرید سدیم هم تعادل اسمزی (Osmotic) را حفظ می‌کند.
روش آماده‌سازی آلکالین پپتون واتر
- 20 گرم پپتون را به 1 لیتر آب مقطر اضافه کنید.
- آن را خوب مخلوط کرده، در ظروف نهایی بریزید و با اتوکلاو کردن در دمای 121 درجه سانتی‌گراد به مدت 15 دقیقه استریل کنید.
- نمونه‌های سواب (Swab) را مستقیماً در آب قلیایی پپتون تلقیح کنید.
- موادی که مستقیماً از طریق سواب کشت نمیشوند، ممکن است با استفاده از یک لوپ (Loop) میکروبیولوژیکی استریل به محیط منتقل شوند.
- برای نمونه‌های مدفوع، تقریباً 1 گرم از نمونه را به صورت آسپتیک (Aseptic) به محیط منتقل کنید و خوب مخلوط کنید.
- براث‌های تلقیح شده را در دمای 35 تا 37 درجه سانتی‌گراد به مدت 5 تا 6 ساعت یا 18 تا 20 ساعت در دمای 18 تا 20 درجه سانتی‌گراد انکوبه کنید.
تفسیر نتایج در مورد آلکالین پپتون واتر
رشد ارگانیسم در لوله‌های آزمایش با کدورت محیط در مقایسه با لوله تلقیح نشده (لوله کنترل)، نشان داده می‌شود.
| ارگانیسم | رشد |
| Vibrio parahaemolyticus | افزایش کدورت در محیط |
| Vibrio vulnificus | افزایش کدورت در محیط |
| Vibrio furnissii | افزایش کدورت در محیط |
| Vibrio cholerae serotype Inaba | افزایش کدورت در محیط |
| Vibrio cholerae serotype Ogawa | افزایش کدورت در محیط |
موارد استفاده از آلکالین پپتون واتر
- معمولاً برای غنی‌سازی گونه‌های ویبریو کلرا و ویبریو از غذا، آب و نمونه‌های بالینی، استفاده می‌شود.
- همچنین می‌توان از محیط کشت براث برای بررسی میکروسکوپی مستقیم نمونه‌ها به روش قطره معلق (Hanging drop) استفاده کرد.
- هم به عنوان براث غنی‌سازی و هم به عنوان محیط انتقال استفاده می‌شود.
- این محیط کشت در ابتدا به عنوان یک براث غنی‌کننده غیرانتخابی برای کشت آئروموناس (Aeromonas) استفاده می‌شد.
محدودیت‌ها
- انکوباسیون طولانی مدت منجر به رشد ارگانیسم‌های آلوده کننده سرکوب شده می‌شود.
- رشد حاصل از براث غنی‌سازی، در محیط‌های انتخابی پلیت استفاده می‌شود. برای شناسایی بیوشیمیایی کشت خالص توصیه می‌شود.
- سویه‌های خاصی از گونه‌های ویبریو که به غلظت کلرید سدیم بیشتری نیاز دارند، ممکن است رشد ضعیفی را نشان دهند.
- بازیابی بیشتری از این براث غنی‌شده روی محیط‌های انتخابی مورد نیاز است.
- برای شناسایی کامل، باید آزمایشات بیوشیمیایی روی ایزوله‌های خالص انجام شود.
جهت خرید و یا استعلام قیمت با ما تماس بگیرید یا در واتسپ پیام بزارید
همچنین بخوانید:
- ویبریو ولنیفیکوس چیست؟ زیستگاه، مورفولوژی، ویژگی ها و بیماری زایی
- محیط کشت چیست؟ آشنایی با انواع محیط کشت و کاربرد
مترجم: صادق حسینی‌کیا
