هکتون انتریک آگار (محیط کشت HE): ترکیب، اصول، آماده‌سازی و نتایج

• هکتون انتریک آگار یک محیط انتخابی و افتراقی است که برای جداسازی و افتراق گونه‌های سالمونلا (Salmonella) و شیگلا (Shigella) از سایر باکتری‌های خانواده انتروباکتریاسه (Enterobacteriaceae) طراحی شده است.
• این محیط در سال 1968 توسط Sylvia King و William I. Metzger معرفی شد. آن‌ها در حین کار در مؤسسه Hektoen در شیکاگو، محیط کشت هکتون انتریک آگار را برای افزایش بازیابی سالمونلا و شیگلا از نمونه‌های بالینی، فرموله کردند.

ترکیبات هکتون انتریک آگار

pH نهایی (در دمای 25 درجه سانتی‌گراد): 0.2±7.5

اصول محیط کشت HE

• هکتون انتریک آگار محیطی است که به استفاده از نمک‌های صفراوی برای مهار انتخابی و دو سیستم اندیکاتوری متکی است:

1. بروموتیمول بلو و اسید فوشین به عنوان اندیکاتور‌های کاتابولیسم کربوهیدرات.
2. آهن فریک به عنوان اندیکاتور تشکیل سولفید هیدروژن (Hydrogen sulfide) از تیوسولفات.

• HE آگار باعث رشد خوب شیگلا می‌شود، زیرا مهار این ارگانیسم‌ها توسط نمک‌های صفراوی با افزودن مقادیر نسبتاً زیاد پپتون و کربوهیدرات‌ها کاهش می‌یابد.
• این محیط افتراق کلنی خوبی را فراهم کرده، برخی از کلیفرم‌ها و سایر باکتری‌های غیر تخمیرکننده لاکتوز را مهار و در نتیجه شناسایی سالمونلا و شیگلا را از محصولات غذایی تسهیل می‌کند.
• HE آگار از پپتون پروتئوز، عصاره مخمر، کلرید سدیم، لاکتوز، ساکارز، سالیسین، برموتیمول بلو، اسید فوشین، تیوسولفات سدیم، سیترات آمونیوم آهن (III)، نمک‌های صفراوی، آگار و آب مقطر یا دیونیزه تشکیل شده است.
• در HE آگار، باکتری‌های سالمونلا کلنی‌های سبز یا آبی-سبز شفاف با یا بدون مراکز سیاه تولید می‌کنند و تقریباً به صورت کلنی‌های کاملاً سیاه ظاهر می‌شوند.
• شیگلا کلنی‌های سبز و شفاف تولید می‌کند. از آن‌جایی که سایر ارگانیسم‌ها کلونی‌های مشابه سالمونلا و شیگلا تشکیل می‌دهند، آزمایش‌های تاییدی بیوشیمیایی و سرولوژیکی ضروری است.
• باکتری‌های گرم منفی تخمیر کننده لاکتوز، ساکارز یا سالیسین، کلونی‌هایی به رنگ ماهی سالمون (رنگ صورتی روشن) تولید می‌کنند.

آماده‌سازی و روش استفاده از هکتون انتریک آگار

• 66 گرم از محیط را در 1000 میلی‌لیتر آب تصفیه شده / مقطر بریزید.
• آن را حرارت داده تا به جوش آید و محیط کاملا حل شود.

توجه: محیط را اتوکلاو نکنید.

• آن را تا دمای 45 تا 50 درجه سانتی‌گراد خنک کنید.
• محیط را خوب مخلوط کرده و در پلیت‌های پتری (Petri plate) استریل بریزید.
• محیط را با مدفوع تازه ساسپند شده در محلول رینگر (Ringer) تلقیح کنید یا این که محیط را مستقیماً با سواب رکتوم تلقیح کنید.
• تلقیح را پخش کنید تا کلنی‌ها به خوبی از هم جدا شوند.
• به مدت 18 تا 24 ساعت در دمای 37 درجه سانتی‌گراد انکوبه کنید.
• انکوباسیون بیشتر، افتراق بین سالمونلا و شیگلا را بهبود می‌بخشد.

تفسیر نتایج در HE آگار

• تخمیرکننده‌های سریع لاکتوز (مانند coli) تا حدودی مهار می‌شوند و کلنی‌هایی به رنگ نارنجی روشن تا صورتی سالمون تولید می‌کنند.
• کلنی‌های سالمونلا به رنگ سبز مایل به آبی معمولاً با مراکز سیاه رنگ مربوط به گاز سولفید هیدروژن هستند.
• شیگلا سبزتر از سالمونلا به نظر می‌رسد و رنگ آن در حاشیه کلنی محو می‌شود.
• سویه‌های پروتئوس (Proteus) تا حدودی مهار می‌شوند. کلنی‌هایی که رشد می‌کنند نسبت به گونه‌های سالمونلا یا شیگلا، شفاف و کوچک هستند و از نظر ظاهری براق‌تر یا آبکی‌تر هستند.

موارد استفاده از هکتون انتریک آگار

• محیط کشت هکتون انتریک آگار برای جداسازی افتراقی و انتخابی گونه‌های سالمونلا و شیگلا از نمونه‌های پاتولوژیک روده مطابق با فارماکوپه ایالات متحده، توصیه شده است.
• این محیط توسط فارماکوپه 2009 ایالات متحده برای تست وجود سالمونلا در مکمل‌های رژیمی توصیه شده است.
• این محیط در تست حضور سالمونلا در نمونه‌های غذایی با استانداردهای مختلف توصیه شده است.
• HE آگار در حال حاضر به عنوان یک محیط کشت پلیت مستقیم و غیرمستقیم برای نمونه‌های مدفوع به منظور افزایش بازیابی گونه‌های سالمونلا و شیگلا از میان تعداد زیادی فلور (Flora) طبیعی مدفوعی، استفاده می‌شود.
• از این آگار به عنوان یک محیط کشت پلیت برای بازیابی پاتوژن‌های دستگاه گوارش مانند سالمونلا و شیگلا از غذا، آب و نمونه‌های مدفوع مشکوک به وجود این ارگانیسم‌ها، استفاده می‌شود.

محدودیت‌های هکتون انتریک آگار

• استفاده از تنها یک محیط کشت به ندرت قادر به بازیابی همه پاتوژن‌های موجود در یک نمونه است. بنابراین محیط‌های بیشتری برای جداسازی سالمونلا و یا شیگلا و احتمالاً سایر پاتوژن‌های روده‌ای باید با نمونه تلقیح شود.
• کلنی‌های پروتئوس میرابیلیس (Proteus mirabilis) در این محیط ممکن است شبیه کلنی‌های سالمونلا باشند.
• برخی از سویه‌های شیگلا ممکن است به انکوباسیون 42 تا 48 ساعته نیاز داشته باشند.
• اگرچه آزمایش‌های تشخیصی خاصی ممکن است مستقیماً بر روی این محیط انجام شود، آزمایشات بیوشیمیایی و در صورت لزوم ایمونولوژیک با استفاده از کشت‌های خالص برای شناسایی کامل ضروری است.
• کلنی‌هایی که مشکوک به سالمونلا یا شیگلا هستند باید از نظر بیوشیمیایی و سرولوژیکی تایید و شناسایی شوند.

جهت خرید و یا استعلام قیمت با ما تماس بگیرید یا در واتسپ پیام بزارید

02186073470

همچنین بخوانید:

• محیط کشت CVA (کمپیلوباکتر بلاد آگار): ترکیب، اصول، آماده‌سازی، نتایج و کاربرد
• زاپکس آگار (محیط کشت CZA): ترکیب، اصول، آماده‌سازی، نتایج و کاربرد
• محیط کشت BSA: ترکیب، اصول، آماده‌سازی، نتایج و کاربرد
• محیط کشت DCA: ترکیب، اصول، روش آماده‌سازی، نتایج و کاربرد

منبع

مترجم: صادق حسینی‌کیا