رنگ آمیزی کالکوفلور سفید (Calcofluor White Staining) چیست؟
- کالکوفلور سفید یک رنگ آبی فلورسنت شیمیایی است که به طور غیر اختصاصی برای اتصال به پلیمرهای پلیساکارید (Polysaccharide) مرتبط با بتای کیستهای آمیب (Amoebic cyst) استفاده میشود.
- قابلیت آن، توانایی اتصال به پلیساکاریدهای بتا 3-1 و بتا 4-1 در کیتین (Chitin) و سلولز (Cellulose) است که در دیواره سلولی قارچها، گیاهان و جلبکها وجود دارد.
- این روش به دلیل سرعت در بررسی سلولها، جایگزین روش رنگ آمیزی با هیدروکسید پتاسیم (Potassium Hydroxide (KOH)) شد.
اهداف رنگ آمیزی کالکوفلور سفید
- برای رنگ آمیزی عوامل قارچی و انگلی
- برای مشاهده وجود عوامل قارچی و انگلی در زیر میکروسکوپ فلورسنت
اصل رنگ آمیزی کالکوفلور سفید
- از روش رنگ آمیزی کالکوفلور سفید بهعنوان یک رنگ تطبیقی به ویژه برای شناسایی عفونت قارچی اونیکومایکوز (Onychomycosis) استفاده میشود.
- ساختارهای حاوی کیتین زیر نور فرابنفش در میکروسکوپ فلورسنت به رنگ سفید درخشان، فلورسان میشوند.
- رنگ کالکوفلور سفید به عنوان یک فلوروکروم (Fluorochrome) غیر اختصاصی که به دیواره کیتین و سلولوز متصل میشود، به عنوان سریعترین روش شناسایی قارچها و مخمرهای بیماریزا مانند پنوموسیستیس کارینی (Pneumocystis carinii)، میکروسپوریدیوم (Microsporidium)، آکانتامبا (Acanthamoeba)، ناگلریا (Naegleria) و گونههای بالاموتیا (Balamuthia)، شناخته شده است.
- رنگ کالکوفلور سفید هنگامی که با هیدروکسید پتاسیم مخلوط میشود، به خوبی عوامل قارچی را نمایان میکند.
- ضد رنگ (Counterstain) مورد استفاده در این روش، رنگ Evans است که پسزمینه تیرهای را تشکیل میدهد و بافتها و سلولها را قادر میسازد با استفاده از القا با نور آبی و نه اشعه ماوراء بنفش، فلورسانس کنند.
- عوامل دیگر، رنگ قرمز مایل به نارنجی فلورسانس میکنند در حالی که عوامل قارچی و انگلی به رنگ سبز مایل به زرد درخشان فلورسانس مینمایند.
شناساگرها
- رنگ کالکوفلور سفید
- هیدروکسید پتاسیم
روش رنگ آمیزی کالکوفلور سفید
- نمونه را با دقت روی یک لام شیشهای تمیز قرار دهید.
- برای ایجاد یک فلورسانس شدید، یک قطره از رنگ آمیزی کالکوفلور سفید را اضافه کنید.
- یک قطره هیدروکسید پتاسیم 10% اضافه کنید.
- نمونه را با یک لامل بپوشانید و بگذارید برای 1 دقیقه بماند تا رنگ را جذب کند.
- رنگ اضافی را با یک حوله کاغذی خشک با فشار ملایم روی لکه پاک کنید.
- رنگ را زیر پرتوهای فرابنفش با بزرگنمایی 100 تا 400 برابر مشاهده کنید.
نتایج
قارچها، کیستهای پنوموسیستیس، و انگلها در زیر میکروسکوپ فلورسنت فرابنفش، به رنگ سبز مایل به زرد درخشان به نظر میرسند.
![رنگ آمیزی کالکوفلور سفید](https://www.geniranlab.ir/wp-content/uploads/2023/09/%D8%B1%D9%86%DA%AF-%D8%A2%D9%85%DB%8C%D8%B2%DB%8C-%DA%A9%D8%A7%D9%84%DA%A9%D9%88%D9%81%D9%84%D9%88%D8%B1-%D8%B3%D9%81%DB%8C%D8%AF.webp)
تفسیر
محلولهای آبدار کالکوفلور سفید، فلورسانس را در محدوده طول موج 300 تا 412 نانومتر (با حداکثر جذب در 347 نانومتر) جذب میکنند. حداکثر القا و فلورسانس با نور فرابنفش اتفاق میافتد، اگرچه القا با نور بنفش یا آبی-بنفش نیز نتایج خوبی به همراه دارد. بافتها فلورسانس پسزمینه زرد مایل به سبز را نشان میدهند که در قارچها و انگلها شدیدتر و قابل مشاهدهتر هستند.
کاربردهای رنگ آمیزی کالکوفلور سفید
- رنگ آمیزی کالکوفلور سفید را میتوان در قارچشناسی و انگلشناسی بالینی جهت:
- نشان دادن حضور انگلهای آمیب با شناسایی کیستهای آنها.
- رنگ آمیزی اسکار جوانههای سلولهای مخمر با محتوای بیشتر کیتین که امکان تعیین کمیت اسکار جوانهها (که نشاندهنده سن سلول است) را فراهم میکند.
استفاده کرد.
- رنگ آمیزی کالکوفلور سفید همچنین برای تقویت پاسخ مخمرها در پاپ اسمیر با رنگ پاپانیکولائو (Papanicolaou) استفاده میشود.
- این روش برای رنگ آمیزی پنوموسیستیس (Pneumocystis)، میکروسپوریدیا (Microsporidia)، کریپتوسپوریدیوم (Cryptosporidium) و برخی کیستهای انگلی که کالکوفلور مثبت هستند، استفاده میشود.
- جهت تشخیص قارچ کاندیدا (Candida) در ضایعات سرطانی و پیش سرطانی در زیر میکروسکوپ فلورسنت، از رنگ آمیزی کالکوفلور سفید استفاده میشود.
- کالکوفلور همچنین به عنوان رنگ در لباسهای سفید استفاده میشود و یک ظاهر مشکی ایجاد میکند.
- کالکوفلور یک رنگ روشن کننده پارچه است که قابل حل در آب و بیرنگ میباشد. از این رو به عنوان سفیدکننده پارچه به مواد شوینده اضافه میشود.
مزایا
- این روش یک راه سریع و آسان برای تشخیص در سیتوپاتولوژی (Cytopathology) و هیستوپاتولوژی (Histopathology) است
- برای رنگ آمیزی موثر به شناساگر خاصی نیاز ندارد.
محدودیتها
- رنگ آمیزی کالکوفلور سفید گران است.
- این روش ممکن است در برخی موارد دقیق نباشد.
مطالب مرتبط:
- رنگ گیمسا (Giemsa): اصول، پروسه آمادهسازی و استفاده، نتایج و تفسیر
- رنگ رایت
- رنگ Luxol fast blue stain چیست؟
- رنگ سافرانین
- رنگ های رومانوفسکی: اصول، انواع، کاربردها
- رنگ آمیزی سلول ها با رنگ های هوچست Hoechst و DAPI
مترجم: صادق حسینیکیا