تکنیک دیفریز سلولی

تکنیک دیفریز سلولی

بسیاری از سلول های بدست آمده از مجموعه های مختلف در سطح جهان به صورت منجمد می باشند و برای استفاده از آن ها باید این رده های سلولی را ذوب کرد و کشت داد. برخی از محافظت کننده ها مانند DMSO، در دمای بالاتر از 4 درجه سانتیگراد سمی هستند، بنابراین ضروری است که محیط کشت این سلول ها به سرعت ذوب شده و در محیط کشت رقیق شوند تا اثرات سمی به حداقل برسد.

مواد مورد نیاز:

• محیط کشت سلولی: از قبل گرم شده در دمای مناسب (به محیط و درجه حرارت صحیح به برگه داده سلول خط ECACC مراجعه کنید.)
• الکل 70٪
• DMSO
• محلول trypan blue

تجهیزات تکنیک دیفریز سلولی :

• تجهیزات محافظ شخصی (دستکش، روپوش، …)
• ظروف حمل و نقل آمپول های یخ زده به عنوان مثال جعبه یخ خشک یا نیتروژن مایع
• حمام آب در دمای مناسب تنظیم شده است
• هود ایمنی زیستی در سطح مهار مناسب
• انکوباتور
• فلاسک های از پیش برچسب خورده
• میکروسکوپ کنتراست فاز معکوس
• هموسیتومتر یا شمارنده سلول خودکار
• سانتریفیوژ
• پیپت ها
• کرایوویال سلول

پروتکل تکنیک دیفریز سلولی :

1. برگه اطلاعات مربوط به رده سلولی را بخوانید تا الزامات خاصی را که برای آن سلول نیاز است تعیین کنید.
2. فلاسک ها را آماده کنید. (برچسب با نام خط سلول و تاریخ)
3. یک کرایوویال سلول را از محلول نیتروژن مایع با پوشیدن وسایل محافظت کننده شخصی مناسب برداشته و در ظرف ازت مایع یا روی یخ خشک به آزمایشگاه منتقل کنید.
4. کرایوویال را سریعاً به یک حمام آب 37 درجه سانتیگراد منتقل کنید تا در صورت وجود تنها یک یا دو کریستال یخ کوچک، در صورت وجود (1-2 دقیقه) بماند. ذوب کردن سریع برای به حداقل رساندن هرگونه آسیب در غشای سلولی مهم است.
5. نکته مهم این است که کرایوویال را کاملاً در حمام آب فرو نکنید زیرا این ممکن است خطر آلودگی را افزایش دهد.
6. کل محتوای کرایوویال را درون یک لوله استریل (مثل فالکون 15 میلی لیتر) قرار دهید. سپس به آرامی 5 میلی لیتر محیط از قبل گرم شده را که قبلاً با ترکیبات مناسب تکمیل شده است اضافه کنید.
7. در رده های سلولی چسبنده برای دستیابی به تراکم سلول بهتر، حجم محیط و در صورت لزوم اندازه فلاسک را تنظیم کنید.
8. در رده های سلولی معلق یک مرحله قبل از سانتریفیوژ برای از بین بردن محافظ ها انجام می شود. یعنی پلت سلولی را با استفاده از سانتریفیوژ با سرعت 150 g به مدت 5 دقیقه جدا کرده و آن را در محیط تازه و حجم مناسب معلق می کنیم.
9. در دما و سطح CO2 توصیه شده در برگه اطلاعات انکوباسیون را انجام دهید. در صورت استفاده از دستگاه انکوباتور تغذیه شده با CO2، فلاسک باید دارای درپوش دریچه ای باشد تا بتواند تبادل گاز را انجام دهد.
10. فلاسک سلول مورد نظر را بعد از 24 ساعت بررسی کرده تا از عدم وجود آلودگی مطمئن شوید.

برای مطالعه سایر تکنیک آزمایشگاهی کلیک کنید.

برای مشاهده و ثبت نام دوره کارآموزی کشت سلولی اینجا کلیک کنید

برای سفارش خدمات به آزمایشگاه کشت سلول ژنیران اینجا کلیک کنید