تکنیک تست سمیت شناسی (MTT)

از روش MTT برای اندازه گیری فعالیت متابولیک سلولی به عنوان شاخص زنده ماندن سلول، تکثیر و سمیت سلولی استفاده می شود. این روش رنگ سنجی بر اساس کاهش نمک تتراسولیوم زرد (3- (4،5-دی متیل تیتازول-2-ایل) -2-5-دیفنیل تترازولیوم برمید یا MTT) به کریستال های فرمازان بنفش رنگ توسط سلول های فعال متابولیکی است. سلولهای زنده حاوی آنزیم های اکسیدوردوکتاز وابسته به NAD (P) H هستند که باعث کاهش MTT به فرمازان می شوند. بلورهای فرمازان نامحلول با استفاده از DMSO، حل شده و محلول رنگی حاصل با اندازه گیری میزان جذب توسط دستگاه نانودراپ در 500-600 نانومتر میزان زنده مانی سلولی را نشان می دهد.

IC50 چیست؟

غلظت مهار کننده نیمی حداکثر (IC50) اندازه گیری قدرت یک ماده در مهار یک عملکرد بیولوژیکی یا بیوشیمیایی خاص است. IC50 یک اندازه گیری کمی است که نشان می دهد چه مقدار از ماده مهاری خاص (به عنوان مثال دارو) برای مهار، در شرایط آزمایشگاهی یک فرآیند بیولوژیکی خاص یا مؤلفه بیولوژیکی 50٪ مورد نیاز است.

پروتکل

1. سلول های مورد نظر را تا آنجا کشت داده که به تراکم یا تعداد مورد نظر برسند.
2. سلولهای را از فلاسک جدا کرده و می شماریم.
3. میزان مورد نیاز از سلول ها را در خانه های پلیت 96 می ریزیم (seeding).
4. 24 ساعت انکوباسیون.
5. دارو ها را می توان با دوز ها و روش های مختلف به سلول های هر خانه اضافه کرد (treatment).
6. بسته به نوع تست، ساعات انکوباسیون با دارو می تواند 24، 48 و یا 72 ساعت باشد.
7. پس از انکوباسیون دارو، مایع رویی در هر خانه را خارج می کنیم.
8. 60 میکرولیتر محلول MTT به هر خانه اضافه می کنیم.
9. پس از گذشت 3 تا 4 ساعت، محلول را خارج می کنیم.
10. توسط DMSO که یک حلال قوی است، رنگ بنفش را موجود در خانه ها را حل می کنیم.
11. با استفاده از نانودراپ و در 570 نانومتر، جذب را خوانده و IC50 را محاسبه می کنیم.

برای مطالعه سایر تکنیک آزمایشگاهی کلیک کنید.

برای مشاهده و ثبت نام دوره کارآموزی کشت سلولی اینجا کلیک کنید

برای سفارش خدمات به آزمایشگاه کشت سلول ژنیران اینجا کلیک کنید