ابزار و وسایل آزمایشگاهی شامل، محلول ها کیت ها
Loading dye چیست؟
بافر لود کننده و یا Loading dye چیست؟
بافر های لود کننده و یا Loading dyes برای آماده سازی مارکرهای DNA و نمونه ها به جهت ران کردن روی ژل های الکتروفورز استفاده می شود. این بافرها را می توان پیش از لود نمونه ها روی ژل و یا از قبل به نمونه ها اضافه کرد. برای مثال DNA Ladder ها یا سایز مارکرهای استفاده شده در الکتروفورز از قبل با لودینگ بافر ها ترکیب شده اند.
اجزای تشکیل دهنده و نقش بافر های لود کننده (Loading dyes):
بافر های لود کننده جزء مهمی در الکتروفورز ژل هستند و برای استفاده با نمونه ها مخلوط می شوند. آنها هم برای آگارز و هم برای ژل های پلی آکریل آمید استفاده می شوند. بافر های لود کننده عمدتاً از رنگ، فیکول یا گلیسرول و آب، با زایلن سیانول، تریس و اتیلن دی آمین تترااستیک اسید (EDTA)(اختیاری)تشکیل شده‌اند.
غلظت بالای EDTA از DNA در برابر تخریب توسط نوکلئازهای وابسته به فلز همانند یون های دوظرفیتی منیزیم محافظت می کند. در برخی موارد SDS نیز به بافر لودکننده اضافه می شود. وجود SDS تعاملات DNA-پروتئین را از بین برده و از تغییر ژل جلوگیری می کند در نتیجه برای الکتروفورز پروتئین ها روی ژل SDS-PAGE استفاده می شود.
Loading dyes ها چند هدف را دنبال می کنند: یک اینکه نمونه ها را رنگ کرده تا تشخیص موقعیت حدودی نمونه ها در ژل امکان پذیر گردد (دقت شود که منظور از رنگ کردن نمونه ها تنها ایجاد یک رنگ موقتی است که در ادامه در حین الکتروفورز از نمونه ها جدا شده و جلوتر از آن ها حرکت می کند بنابراین نقش خط راهنما را برای تعقیب نمونه ها روی ژل ایفا می کنند) و دو آن که به دلیل تراکم بالای آن ها به خاطر داشتن گلیسرول از پخش DNA در بافر الکتروفورز جلوگیری می کنند.
بروموفنول بلو چیست؟
یکی از مهم ترین رنگ های استفاده شده در Loading dyes برموفنل بلو می باشد. برموفنل بلو علاوه بر رنگ به عنوان یک نشانگر pH و یک نشانگر رنگ الکتروفورتیک استفاده می شود. برای ساخت آن به محلول داغ فنل سولفون فتالئین در اسید استیک یخچالی آرام آرام برم اضافه می شود. محلول بروموفنول بلو به عنوان رنگ در loading dye برای الکتروفورز DNA و پروتئین استفاده می شود. قبل از لود نمونه ها روی ژل با نمونه‌ها ترکیب شده تا چگالی لازم برای ته نشینی نمونه ها در ته چاهک های ژل فراهم شود.
بروموفنول بلو به عنوان یک نشانگر رنگ برای نظارت بر فرآیند الکتروفورز ژل آگارز و یا آکریل آمید استفاده می شود. از آنجایی که بروموفنول بلو حامل بار منفی خفیف در pH متوسط است، در همان جهت DNA یا پروتئین در ژل مهاجرت می کند.
سرعت مهاجرت آن بسته به تراکم ژل و ترکیب بافر متفاوت است، اما در یک ژل آگارز معمولی 1٪ در بافر TAE یا بافر TBE، برموفنل بلو با سرعتی برابر یک قطعه DNA حدودا 300 جفت بازی و در یک ژل آگارز 2 درصد با سرعتی برابر یک قطعه DNA حدودا 150 جفت بازی حرکت می کند. علاوه بر رنگ بروموفنول بلو می توان از رنگ های دیگری همچون زایلن سیانول (Xylene cyanol) و(Orange G) نیز برای این منظور استفاده کرد.
در PH خنثی، رنگ بروموفنول بلو، نور قرمز را جذب کرده و نور آبی ساطع می کند. (پیک جذب آن 600 نانومتر در pH پایه 12 است.) بنابراین محلول آن ها به رنگ آبی دیده می شود. در pH پایین، رنگ، نور ماوراء بنفش و آبی را جذب و محلول زرد دیده می شود. در محلول با pH 3.6 که با انحلال در آب بدون تنظیم pH به دست می‌آید، بروموفنل بلو رنگ قرمز سبز ایجاد می کند.
سلام آیا وسایل نگهدرای حیوانات آزمایشگاهی را دارید؟
سلام لطفا با آزمایشگاه تماس بگیرید.