راهنمای خرید رده سلولی A375

یک رده سلولی است که مورفولوژی اپی تلیال را نشان می دهد که از پوست یک بیمار زن 54 ساله مبتلا به ملانوم بدخیم جدا شده است. این رده سلولی کنترل ایده آلی برای رده سلولی ایزوژنیک NRAS جهش یافته A375 (ATCC CRL-1619IG-2) است و می تواند در تحقیقات سم شناسی و ایمونوآنکولوژی استفاده شود. این رده سلولی میزبان ترانسفکشن مناسبی است.

این رده سلولی همچنین کنترل ایده آلی برای رده سلولی ایزوژنیک NRAS جهش یافته-A375 (ATCC CRL-1619IG-2) است.

سطح ایمنی زیستی: BSL1 (بیشتر بدانید)

کاتالوگ انگلیسی ATCC رده سلولی A375

جهت مشاوره با ما تماس بگیرید

رویه تکمیل سفارشات

حجم فلاسک

صاف

شناسه محصول: نامعلوم دسته: رده سلولی

رده محصولات	سلول های انسانی
ارگانیسم	انسان خردمند، انسان
مورفولوژی	اپیتلیال
بافت	پوست
بیماری	ملانومای بدخیم
کاربردها	کشت سلولی سه بعدی غربالگری با کارایی بالا سم شناسی ایمونوآنکولوژی
شرایط نگهداری	فاز بخار نیتروژن مایع

عمومی:

استفاده در نظر گرفته شده

این محصول فقط برای استفاده تحقیقات آزمایشگاهی در نظر گرفته شده است. این محصول برای هیچ گونه استفاده درمانی حیوانی یا انسانی، مصرف انسانی یا حیوانی، یا هر گونه استفاده تشخیصی در نظر گرفته نشده است.

حجم فلاسک	T25, T75

خصوصیات

خصوصیات رشد	چسبنده
سن	54 ساله
جنسیت	زن
کاریوتایپ	این یک هایپوتریپلوئید با تعداد معین 62 کروموزوم است. 9 کروموزوم نشانگر وجود دارد که معمولاً در هر سلول یافت می شود و N2 ،N6 و N22 طبیعی در یک نسخه در هر سلول وجود دارد.
تومورزایی	بله در موش های سرکوب شده سیستم ایمنی

اطلاعات نگهداری

دستورالعمل باز کردن و ذخیره سازی

1- تمام ظروف را از نظر نشتی یا شکستگی بررسی کنید.

2- سلول های یخ زده را از بسته بندی یخ خشک خارج کرده و بلافاصله سلول ها را در دمای زیر 130- درجه سانتی گراد ترجیحاً در بخار نیتروژن مایع قرار دهید تا آماده استفاده شود.

محیط کامل

محیط پایه برای این رده سلولی Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM)

برای ساختن محیط رشد کامل، سرم جنین گاوی به غلظت نهایی 10%را به محیط پایه اضافه کنید.

درجه حرارت

37 درجه

شرایط نگهداری

برای اطمینان از بالاترین سطح زنده ماندن، ویال را ذوب کرده و در اسرع وقت پس از دریافت، کشت را آغاز کنید. اگر در بدو ورود، ادامه نگهداری کشت منجمد ضروری باشد، باید در فاز بخار نیتروژن مایع و نه در دمای 70- درجه سانتی گراد نگهداری شود. نگهداری در دمای -70 درجه سانتیگراد باعث از بین رفتن قابلیت زنده ماندن می شود.

1- ویال را با هم زدن ملایم در حمام آب 37 درجه سانتی گراد ذوب کنید. برای کاهش احتمال آلودگی، O-ring و کلاهک را خارج از آب نگه دارید. ذوب شدن باید سریع باشد (تقریباً 2 دقیقه).

2- به محض ذوب شدن محتویات، ویال را از حمام آب خارج کرده و با غوطه ور کردن یا پاشیدن با اتانول 70 درصد آن را ضدعفونی کنید. تمام عملیات از این نقطه به بعد باید در شرایط سخت اسپتیک انجام شود.

3- محتویات ویال را به یک فلاسک کشت بافت 75 سانتی متر مربعی منتقل کنید و با محیط کشت کامل توصیه شده رقیق کنید (اطلاعات دسته ای خاص را برای نسبت رقت توصیه شده ببینید). مهم است که از قلیایی بودن بیش از حد محیط در طول بازیابی سلول ها جلوگیری شود. پیشنهاد می شود، قبل از افزودن محتویات ویال، ظرف کشت حاوی محیط رشد حداقل به مدت 15 دقیقه در انکوباتور قرار داده شود تا محیط به pH طبیعی خود (7/0 تا 7/6) برسد.

4- کشت را در دمای 37 درجه سانتی گراد در انکوباتور مناسب انکوبه کنید. در صورت استفاده از محیطی که در این برگه محصول توضیح داده شده است، CO2 5٪ در جو هوا توصیه می شود.

اگر مایل هستید که عامل محافظ انجماد فوراً حذف شود یا سوسپانسیون سلولی غلیظ تری به دست آید، سوسپانسیون سلولی را در حدود g125 به مدت 5 تا 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید. مایع رویی را دور بریزید و سلول ها را با محیط رشد تازه با نسبت رقت توصیه شده در اطلاعات دسته خاص، مجدداً معلق کنید.

روش پاساژ دادن

حجم ها برای یک فلاسک 75 سانتی متر مربع داده شده است. مقدار محیط تفکیک مورد نیاز را متناسب با ظروف کشت با اندازه های دیگر افزایش یا کاهش دهید. فلاسک های Corning T-75 (کاتالوگ شماره 430641) برای زیرکشت این محصول توصیه می شود.

1- محیط کشت را بردارید و دور بریزید.

2- به طور خلاصه لایه سلولی را با محلول 0/25% تریپسین و 0/53 میلی مولار EDTA شستشو دهید تا تمام آثار سرمی حاوی مهارکننده تریپسین پاک شود.

3- 2 تا 3 میلی لیتر محلول Trypsin-EDTA را به فلاسک اضافه کنید و سلول ها را زیر میکروسکوپ معکوس مشاهده کنید تا لایه سلولی پراکنده شود (معمولاً در عرض 5 تا 15 دقیقه).

توجه: برای جلوگیری از انباشته شدن، سلول ها را با ضربه زدن یا تکان دادن فلاسک تکان ندهید در حالی که منتظر جدا شدن سلول ها هستید. سلول هایی که به سختی جدا می شوند ممکن است در دمای 37 درجه سانتیگراد قرار داده شوند تا پراکندگی آنها تسهیل شود.

4- 6 تا 8 میلی لیتر از محیط رشد کامل را اضافه کنید و سلول ها را با پیپت کردن به آرامی آسپیره کنید.

5- مقدار مناسبی از سوسپانسیون سلولی را به رگ های کشت جدید اضافه کنید.

6- کشت ها را در دمای 37 درجه سانتی گراد انکوبه کنید.

نسبت پاساژ: نسبت ساب کالچر 1:3 تا 1:8 توصیه می شود.

تعویض محیط: هر 2 تا 3 روز

معرف برای انجماد

95% محیط کامل + 5% v/v DMSO