راهنمای خرید رده سلولی ACHN

ACHN یک رده سلولی است که مورفولوژی اپیتلیال را نشان می دهد، در سال 1979 از کلیه یک بیمار مرد سفید پوست 22 ساله مبتلا به آدنوکارسینوم سلول کلیوی جدا شد.

سطح ایمنی زیستی: BSL1 (بیشتر بدانید)

کاتالوگ انگلیسی ATCC رده سلولی ACHN

جهت مشاوره با ما تماس بگیرید

رویه تکمیل سفارشات

حجم فلاسک

صاف

شناسه محصول: نامعلوم دسته: رده سلولی

رده محصولات	سلول های انسانی
ارگانیسم	انسان خردمند، انسان
مورفولوژی	اپیتلیال
بافت	آدنوکارسینومای سلولهای کلیوی
بیماری	سرطان
کاربردها	کشت سلولی سه بعدی
شرایط نگهداری	فاز بخار نیتروژن مایع

استفاده در نظر گرفته شده

ACHN ممکن است برای مطالعات ضد پرولیفراتیو با استفاده از اینترفرون های انسانی یا القا کننده های اینترفرون استفاده شود.

حجم فلاسک	T25, T75

خصوصیات

خصوصیات رشد	چسبنده
استخراج	رده سلولی ACHN در نوامبر 1979 از پلورال افیوژن بدخیم یک مرد 22 ساله قفقازی با آدنوکارسینوم کلیوی متاستاتیک به طور گسترده آغاز شد (کالبد شکافی تایید شد). سلول‌ها مستقیماً به فلاسک‌های کشت در Eagle’s MEM با 10% FBS کشت داده شد، سپس نگهداری و 150 روز در فلاسک‌ها منتقل شدند. سپس سلول ها به صورت زیر جلدی به موش های برهنه (Nude mouse) تلقیح شدند. پس از 4 هفته، تومورهای قابل لمس و مهاجم موضعی مشاهده شد. هم سلول های اصلی ACHN و هم سلول های بازیابی شده از تومورهای موش برهنه توسط اینترفرون های انسانی رشد را مهار کردند.
سن	22 ساله
نژاد	سفید
جنسیت	مرد
تومورزایی	بله، در موش های برهنه (تومورها در عرض 21 روز با 100% فرکانس (5/5) در موش‌های برهنه تلقیح زیر جلدی با 10(7) سلول ایجاد شدند)
متاستاز	افیوژن پلورال
ایزوآنزیم ها	G6PD, B
نظرات	رشد توسط اینترفرون انسانی مهار می شود

اطلاعات نگهداری

دستورالعمل باز کردن و ذخیره سازی

1- تمام ظروف را از نظر نشتی یا شکستگی بررسی کنید.

2- سلول های یخ زده را از بسته بندی یخ خشک خارج کرده و بلافاصله سلول ها را در دمای زیر 130- درجه سانتی گراد ترجیحاً در بخار نیتروژن مایع قرار دهید تا آماده استفاده شود.

محیط کامل

محیط پایه برای این رده سلولی (EMEM) Eagle’s Minimum Essential Medium

برای ساختن محیط رشد کامل، سرم جنین گاوی به غلظت نهایی 10% را به محیط پایه اضافه کنید.

درجه حرارت

37 درجه

شرایط نگهداری

برای اطمینان از بالاترین سطح زنده ماندن، ویال را ذوب کرده و در اسرع وقت پس از دریافت، کشت را آغاز کنید. اگر در بدو ورود، ادامه نگهداری کشت منجمد ضروری باشد، باید در فاز بخار نیتروژن مایع و نه در دمای 70- درجه سانتی گراد نگهداری شود. نگهداری در دمای 70- درجه سانتیگراد باعث از بین رفتن قابلیت زنده ماندن می شود.

1- ویال را با هم زدن ملایم در حمام آب 37 درجه سانتی گراد ذوب کنید. برای کاهش احتمال آلودگی، O-ring و کلاهک را خارج از آب نگهدارید. ذوب شدن باید سریع باشد (تقریباً 2 دقیقه).

2- به محض ذوب شدن محتویات، ویال را از حمام آب خارج کرده و با غوطه ور کردن یا پاشیدن با اتانول 70 درصد آن را ضدعفونی کنید. تمام عملیات از این نقطه به بعد باید در شرایط سخت اسپتیک انجام شود.

3- محتویات ویال را به یک فلاسک کشت بافت 75 سانتی متر مربعی منتقل کنید و با محیط کشت کامل توصیه شده رقیق کنید (اطلاعات دسته ای خاص را برای نسبت رقت توصیه شده ببینید). مهم است که از قلیایی بودن بیش از حد محیط در طول بازیابی سلول ها جلوگیری شود. پیشنهاد می شود، قبل از افزودن محتویات ویال، ظرف کشت حاوی محیط رشد حداقل به مدت 15 دقیقه در انکوباتور قرار داده شود تا محیط به pH طبیعی خود (7/0 تا 7/6) برسد.

4- کشت را در دمای 37 درجه سانتی گراد در انکوباتور مناسب انکوبه کنید. در صورت استفاده از محیطی که در این برگه محصول توضیح داده شده است، %5 CO₂ در جو هوا توصیه می شود.

اگر مایل هستید که عامل محافظ انجماد فوراً حذف شود یا سوسپانسیون سلولی غلیظ تری به دست آید، سوسپانسیون سلولی را در حدود g125 به مدت 5 تا 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید. مایع رویی را دور بریزید و سلول ها را با محیط رشد تازه با نسبت رقت توصیه شده در اطلاعات دسته خاص، مجدداً معلق کنید.

روش پاساژ دادن

حجم ها برای یک فلاسک 75 سانتی متر مربع داده شده است. مقدار محیط تفکیک مورد نیاز را متناسب با ظروف کشت با اندازه های دیگر افزایش یا کاهش دهید.

1- محیط کشت را بردارید و دور بریزید.

2- به طور خلاصه لایه سلولی را با محلول 0/25% تریپسین و53/0 میلی مولار EDTA شستشو دهید تا تمام آثار سرمی حاوی مهارکننده تریپسین پاک شود.

3- 2 تا 3 میلی لیتر محلول Trypsin-EDTA را به فلاسک اضافه کنید و سلول ها را زیر میکروسکوپ معکوس مشاهده کنید تا لایه سلولی پراکنده شود (معمولاً در عرض 5 تا 15 دقیقه).

توجه: برای جلوگیری از انباشته شدن، سلول ها را با ضربه زدن یا تکان دادن فلاسک تکان ندهید در حالی که منتظر جدا شدن سلول ها هستید. سلول هایی که به سختی جدا می شوند ممکن است در دمای 37 درجه سانتیگراد قرار داده شوند تا پراکندگی آنها تسهیل شود.

4- 6 تا 8 میلی لیتر از محیط رشد کامل را اضافه کنید و سلول ها را با پیپت کردن به آرامی آسپیره کنید.

5- مقدار مناسبی از سوسپانسیون سلولی را به ظروف کشت جدید اضافه کنید.

6- کشت ها را در دمای 37 درجه سانتی گراد انکوبه کنید.

نسبت پاساژ: نسبت 1:2 و 1:3 توصیه می شود.

تعویض محیط: 2 تا 3 بار در هفته

مواد برای انجماد

95% محیط کامل + 5% v/v DMSO