راهنمای خرید رده سلولی C2C12

C2C12 یک رده سلولی میوبلاست است که یک زیرکلون (تولید شده توسط H. Blau و همکاران) از رده سلولی myoblast موش است که توسط D. Yaffe و O. Saxel ایجاد شده است. رده سلولی C2C12 به سرعت متمایز می شود و میوتوب های انقباضی را تشکیل می دهد و پروتئین های عضلانی مشخصی را تولید می کند. درمان با پروتئین مورفوژنیک استخوان 2 (BMP-2) باعث تغییر مسیر تمایز از میوبلاستیک به استئوبلاستیک می شود.

سطح ایمنی زیستی: BSL1 (بیشتر بدانید)

کاتالوگ انگلیسی ATCC رده سلولی C2C12

جهت مشاوره با ما تماس بگیرید

رویه تکمیل سفارشات

حجم فلاسک

صاف

شناسه محصول: نامعلوم دسته: رده سلولی

رده محصولات	سلول های حیوانی
ارگانیسم	موش
مورفولوژی	میلوبلاست
کلاس بندی	یوکاریوت ها، جانوران، متازوآ، مهره‌داران، چهارپایان
بافت	ماهیچه
کاربردها	کشت سلولی سه بعدی
شرایط نگهداری	فاز بخار نیتروژن مایع

استفاده در نظر گرفته شده

این محصول فقط برای استفاده تحقیقات آزمایشگاهی در نظر گرفته شده است. این برای هیچ گونه استفاده درمانی حیوانی یا انسانی، مصرف انسانی یا حیوانی، یا هر گونه استفاده تشخیصی در نظر گرفته نشده است.

این رده سلولی به عنوان میزبان ترانسفکشن مناسب است.

حجم فلاسک	T25, T75

خصوصیات

خصوصیات رشد	چسبنده
استخراج	این یک زیرکلون (تولید شده توسط H. Blau و همکاران) از رده سلولی myoblast موش است که توسط D. Yaffe و O. Saxel ایجاد شده است.
نژاد	C3H
نظرات	رده سلولی C2C12 به سرعت متمایز می شود و میوتوب های انقباضی را تشکیل می دهد و پروتئین های عضلانی مشخصی را تولید می کند. درمان با پروتئین مورفوژنیک استخوان 2 (BMP-2) باعث تغییر مسیر تمایز از میوبلاستیک به استئوبلاستیک می شود. آزمایش شده و برای ویروس اکتروملیا (آپواکس موش) منفی بود.

اطلاعات نگهداری

دستورالعمل باز کردن و ذخیره سازی

1- تمام ظروف را از نظر نشتی یا شکستگی بررسی کنید.

2- سلول های یخ زده را از بسته بندی یخ خشک خارج کرده و بلافاصله سلول ها را در دمای زیر 130- درجه سانتی گراد ترجیحاً در بخار نیتروژن مایع قرار دهید تا آماده استفاده شود.

محیط کامل

محیط پایه برای این رده سلولی (DMEM) Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium

برای ساختن محیط رشد کامل، سرم جنین گاوی به غلظت نهایی 10% را به محیط پایه اضافه کنید.

درجه حرارت

37 درجه

مقدار Seeding

10³× 5 سلول زنده در هر سانتی متر مربع

شرایط نگهداری

برای اطمینان از بالاترین سطح زنده ماندن، ویال را ذوب کرده و در اسرع وقت پس از دریافت، کشت را آغاز کنید. اگر در بدو ورود، ادامه نگهداری کشت منجمد ضروری باشد، باید در فاز بخار نیتروژن مایع و نه در دمای 70- درجه سانتی گراد نگهداری شود. نگهداری در دمای 70- درجه سانتیگراد باعث از بین رفتن قابلیت زنده ماندن می شود.

1- ویال را با هم زدن ملایم در حمام آب 37 درجه سانتی گراد ذوب کنید. برای کاهش احتمال آلودگی، O-ring و کلاهک را خارج از آب نگهدارید. ذوب شدن باید سریع باشد (تقریباً 2 دقیقه).

2- به محض ذوب شدن محتویات، ویال را از حمام آب خارج کرده و با غوطه ور کردن یا پاشیدن با اتانول 70 درصد آن را ضدعفونی کنید. تمام عملیات از این نقطه به بعد باید در شرایط سخت اسپتیک انجام شود.

3- محتویات ویال را به یک فلاسک کشت بافت 75 سانتی متر مربعی منتقل کنید و با محیط کشت کامل توصیه شده رقیق کنید (اطلاعات دسته ای خاص را برای نسبت رقت توصیه شده ببینید). مهم است که از قلیایی بودن بیش از حد محیط در طول بازیابی سلول ها جلوگیری شود. پیشنهاد می شود، قبل از افزودن محتویات ویال، ظرف کشت حاوی محیط رشد حداقل به مدت 15 دقیقه در انکوباتور قرار داده شود تا محیط به pH طبیعی خود (7/0 تا 7/6) برسد.

4- کشت را در دمای 37 درجه سانتی گراد در انکوباتور مناسب انکوبه کنید. در صورت استفاده از محیطی که در این برگه محصول توضیح داده شده است، %5 CO₂ در جو هوا توصیه می شود.

اگر مایل هستید که عامل محافظ انجماد فوراً حذف شود یا سوسپانسیون سلولی غلیظ تری به دست آید، سوسپانسیون سلولی را در حدود g125 به مدت 5 تا 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید. مایع رویی را دور بریزید و سلول ها را با محیط رشد تازه با نسبت رقت توصیه شده در اطلاعات دسته خاص، مجدداً معلق کنید.

روش پاساژ دادن

مهم – اجازه ندهید کشت سلول ها کاملا پرتراکم شوند.

نباید اجازه داد که کشت سلولها ها پرتراکم شوند زیرا این امر باعث کاهش جمعیت میوبلاستیک در کشت می شود.

هنگامی که محیط با 10% سرم اسب به جای سرم جنین گاوی تکمیل شود، تشکیل میوتوب افزایش می یابد.

1- محیط کشت را بردارید و دور بریزید.

2- به طور خلاصه لایه سلولی را با محلول 0/25% تریپسین و 0/53 میلی مولار EDTA شستشو دهید تا تمام آثار سرمی حاوی مهارکننده تریپسین پاک شود.

3- 2 تا 3 میلی لیتر محلول Trypsin-EDTA را به فلاسک اضافه کنید و سلول ها را زیر میکروسکوپ معکوس مشاهده کنید تا لایه سلولی پراکنده شود (معمولاً در عرض 5 تا 15 دقیقه.)

توجه: برای جلوگیری از انباشته شدن، سلول ها را با ضربه زدن یا تکان دادن فلاسک تکان ندهید در حالی که منتظر جدا شدن سلول ها هستید. سلول هایی که به سختی جدا می شوند ممکن است در دمای 37 درجه سانتیگراد قرار داده شوند تا پراکندگی آنها تسهیل شود.

4- 6 تا 8 میلی لیتر از محیط رشد کامل را اضافه کنید و سلول ها را با پیپت کردن به آرامی آسپیره کنید.

5- مقدار مناسبی از سوسپانسیون سلولی را به ظروف کشت جدید اضافه کنید.

در غلظت سلولی به 10⁵×1/5 و 10⁶×1 سلول زنده در 75 سانتی متر مربع تلقیح شود.

6- کشت ها را در دمای 37 درجه سانتی گراد انکوبه کنید.

تعویض محیط: هر دو تا سه روز

معرف برای انجماد

95% محیط کامل + 5% v/v DMSO