راهنمای خرید رده سلولی MDCK

سلول های MDCK (NBL-2) از بافت طبیعی کلیه از یک کوکر اسپانیل طبیعی، بالغ ماده جدا شد. TMDCK (NBL-2) در تحقیقات سم شناسی و بیوتکنولوژی صنعتی استفاده می شود.

سطح ایمنی زیستی: BSL1 (بیشتر بدانید)

کاتالوگ انگلیسی ATCC رده سلولی MCDK

جهت خرید یا مشاوره با ما تماس بگیرید

رویه ارسال سفارشات

حجم فلاسک

صاف

شناسه محصول: نامعلوم دسته: رده سلولی

رده محصولات	سلول های حیوانی
ارگانیسم	سگ، Canis familiaris
نوع سلول	اپی تلیال
مورفولوژی	اپی تلیال
بافت	کلیه
بیماری	نرمال
کاربردها	کشت سلولی سه بعدی غربالگری با کارایی بالا بیوتکنولوژی صنعتی سم شناسی تولید زیستی
شرایط نگهداری	فاز بخار نیتروژن مایع

استفاده در نظر گرفته شده

این رده سلولی میزبان ترانسفکشن مناسب است و برای تحقیقات آنفلوانزا مفید است.

حجم فلاسک	T25, T75

خصوصیات

خصوصیات رشد	چسبنده
استخراج	رده سلولی MDCK از کلیه یک کوکر اسپانیل ماده بالغ به ظاهر طبیعی گرفته شده است سپتامبر 1958 توسط S.H
سن	بالغ
جنسیت	ماده
کاریوتایپ	تعداد کروموزوم معین برای گونه = 78 محدوده 77-80; 87-90
حساسیت به ویروس	Human Coxsackievirus B 5 Reovirus type 2 Adeno-associated virus 4 Vaccinia virus Vesicular stomatitis virus Adeno-associated virus 5 Human Coxsackievirus B3 Human Coxsackievirus B4 Human poliovirus 2
نظرات	این خط هیپردیپلوئید است و توزیع عدد کروموزوم دو وجهی دارد. هیچ کروموزوم نشانگر قابل شناسایی ثابتی وجود ندارد. یک کروموزوم X طبیعی در اکثر گسترش ها وجود دارد. سلول ها با رنگ آمیزی ایمونوپروکسیداز برای کراتین مثبت هستند. سلول های MDCK برای مطالعه پردازش پروتئین پیش ساز بتا آمیلوئید و مرتب سازی محصولات پروتئولیتیک آن استفاده شده است.

اطلاعات نگهداری

دستورالعمل باز کردن و ذخیره سازی

1- تمام ظروف را از نظر نشتی یا شکستگی بررسی کنید.

2- سلول های یخ زده را از بسته بندی یخ خشک خارج کرده و بلافاصله سلول ها را در دمای زیر 130- درجه سانتی گراد ترجیحاً در بخار نیتروژن مایع قرار دهید تا آماده استفاده شود.

محیط کامل

محیط پایه برای این رده سلولی (EMEM) Eagle’s Minimum Essential Medium

برای ساختن محیط رشد کامل، سرم جنین گاوی به غلظت نهایی 10% را به محیط پایه اضافه کنید.

درجه حرارت

37 درجه

شرایط نگهداری

برای اطمینان از بالاترین سطح زنده ماندن، ویال را ذوب کرده و در اسرع وقت پس از دریافت، کشت را آغاز کنید. اگر در بدو ورود، ادامه نگهداری کشت منجمد ضروری باشد، باید در فاز بخار نیتروژن مایع و نه در دمای 70- درجه سانتی گراد نگهداری شود. نگهداری در دمای -70 درجه سانتیگراد باعث از بین رفتن قابلیت زنده ماندن می شود.

1- ویال را با هم زدن ملایم در حمام آب 37 درجه سانتی گراد ذوب کنید. برای کاهش احتمال آلودگی، O-ring و کلاهک را خارج از آب نگه دارید. ذوب شدن باید سریع باشد (تقریباً 2 دقیقه).

2- به محض ذوب شدن محتویات، ویال را از حمام آب خارج کرده و با غوطه ور کردن یا پاشیدن با اتانول 70 درصد آن را ضدعفونی کنید. تمام عملیات از این نقطه به بعد باید در شرایط سخت اسپتیک انجام شود.

3- محتویات ویال را به یک فلاسک کشت بافت 75 سانتی متر مربعی منتقل کنید و با محیط کشت کامل توصیه شده رقیق کنید (اطلاعات دسته ای خاص را برای نسبت رقت توصیه شده ببینید). مهم است که از قلیایی بودن بیش از حد محیط در طول بازیابی سلول ها جلوگیری شود. پیشنهاد می شود، قبل از افزودن محتویات ویال، ظرف کشت حاوی محیط رشد حداقل به مدت 15 دقیقه در انکوباتور قرار داده شود تا محیط به pH طبیعی خود (7.0 تا 7.6) برسد.

4- کشت را در دمای 37 درجه سانتی گراد در انکوباتور مناسب انکوبه کنید. در صورت استفاده از محیطی که در این برگه محصول توضیح داده شده است، CO2 5٪ در جو هوا توصیه می شود.

اگر مایل هستید که عامل محافظ انجماد فوراً حذف شود یا سوسپانسیون سلولی غلیظ تری به دست آید، سوسپانسیون سلولی را در حدود g 125 به مدت 5 تا 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید. مایع رویی را دور بریزید و سلول ها را با محیط رشد تازه با نسبت رقت توصیه شده در اطلاعات دسته خاص، مجدداً معلق کنید.

روش پاساژ دادن

حجم ها برای یک فلاسک 75 سانتی متر مربع داده شده است. مقدار محیط تفکیک مورد نیاز را متناسب با ظروف کشت با اندازه های دیگر افزایش یا کاهش دهید.

1- محیط کشت را بردارید و دور بریزید.

2- به طور خلاصه لایه سلولی را با محلول تریپسین 0.25% (w/v) – 0.53 میلی مولار EDTA شستشو دهید تا تمام آثار سرمی حاوی مهارکننده تریپسین پاک شود.

3- 2 تا 3 میلی لیتر محلول Trypsin-EDTA را به فلاسک اضافه کنید و سلول ها را زیر میکروسکوپ معکوس مشاهده کنید تا لایه سلولی پراکنده شود (معمولاً در عرض 5 تا 15 دقیقه).

توجه: برای جلوگیری از انباشته شدن، سلول ها را با ضربه زدن یا تکان دادن فلاسک تکان ندهید در حالی که منتظر جدا شدن سلول ها هستید. سلول هایی که به سختی جدا می شوند ممکن است در دمای 37 درجه سانتیگراد قرار داده شوند تا پراکندگی آنها تسهیل شود.

4- 6 تا 8 میلی لیتر از محیط رشد کامل را اضافه کنید و سلول ها را با پیپت کردن به آرامی آسپیره کنید.

5- مقدار مناسبی از سوسپانسیون سلولی را به فلاسک های کشت جدید اضافه کنید.

6- کشت ها را در دمای 37 درجه سانتی گراد انکوبه کنید.

مراحل پاساژ: نسبت 1:2 و 1:6 توصیه می شود

تعویض محیط: هر 2 تا 3 روز

معرف برای انجماد

95% محیط کامل + 5% v/v DMSO