راهنمای خرید رده سلولی A549

سلول های A549 از بافت ریه یک مرد سفید پوست 58 ساله مبتلا به سرطان ریه جدا شد. این رده سلولی را می توان در تحقیقات سرطان، ایمنی-انکولوژی و سم شناسی استفاده کرد.

سطح ایمنی زیستی: BSL1 (بیشتر بدانید)

کاتالوگ انگلیسی ATCC رده سلولی A549

جهت مشاوره با ما تماس بگیرید

رویه تکمیل سفارشات

حجم فلاسک

صاف

شناسه محصول: نامعلوم دسته: رده سلولی

رده محصولات	سلول های انسانی
ارگانیسم	انسان خردمند، انسان
مورفولوژی	اپیتلیال
بافت	ریه
بیماری	کارسینوما
کاربردها	کشت سلولی سه بعدی تولید زیستی تحقیق سرطان غربالگری با کارایی بالا سم شناسی ایمونوآنکولوژی
شرایط نگهداری	فاز بخار نیتروژن مایع

استفاده در نظر گرفته شده

برای استفاده در آزمایش و کالیبراسیون در آزمایشگاه‌های معتبر ISO 17025، برای به چالش کشیدن عملکرد سنجش، اعتبارسنجی یا مقایسه روش‌های آزمایش، و ایجاد حساسیت، خطی بودن و ویژگی در طول اعتبارسنجی یا اجرای سنجش.

این رده سلولی ممکن است به عنوان میزبان انتقال استفاده شود.

حجم فلاسک	T25, T75

خصوصیات

خصوصیات رشد	چسبنده
سن	54 ساله
قومیت	سفید
جنسیت	مرد
استخراج	این رده در سال 1972 توسط D.J. ژیارد و همکاران از طریق کشت ریزنمونه بافت سرطانی ریه از یک مرد 58 ساله قفقازی جداسازی شد
کاریوتایپ	این یک رده سلولی هایپوتریپلوئید انسانی با تعداد 66کروموزوم است که در 24 درصد سلول ها وجود دارد. سلول‌هایی با تعداد 64 (22%)، 65 و 67 کروموزوم نیز در فرکانس‌های نسبتاً بالا رخ داده‌اند. نرخ با پلوئیدی بالاتر پایین در 0/4٪ بود. 6 نشانگر به صورت تک نسخه در تمام سلول ها وجود داشت. آنها عبارتند از der(6)t(1;6) (q11;q27); del(6) (p23); del (11) (q21)، del (2) (q11)، M4 و M5. اکثر سلول ها دارای دو کروموزوم X و Y بودند. با این حال، یک یا هر دو کروموزوم Y در 40 درصد از 50 سلول مورد تجزیه و تحلیل از بین رفتند. کروموزوم‌های N2 و N6 دارای نسخه‌های تکی در هر سلول بودند. و N12 و N17 معمولاً 4 نسخه داشتند. توجه: اطلاعات سیتوژنتیک بر اساس ذخیره اولیه بذر در ATCC است. بی ثباتی سیتوژنتیک در مقالات برای برخی از رده های سلولی گزارش شده است.
بیان آنتی ژن	سلول ها با رنگ آمیزی ایمونوپروکسیداز برای کراتین مثبت هستند.
ایزوآنزیم ها	G6PD, B
نظرات	مطالعات M. Lieber و همکاران. نشان داد که سلول های A549 می توانند لسیتین را با درصد بالایی از اسیدهای چرب اشباع شده با استفاده از مسیر سیتیدین دی فسفوکولین سنتز کنند.

اطلاعات نگهداری

دستورالعمل باز کردن و ذخیره سازی

1- تمام ظروف را از نظر نشتی یا شکستگی بررسی کنید.

2- سلول های یخ زده را از بسته بندی یخ خشک خارج کرده و بلافاصله سلول ها را در دمای زیر 130- درجه سانتی گراد ترجیحاً در بخار نیتروژن مایع قرار دهید تا آماده استفاده شود.

محیط کامل

محیط پایه برای این رده سلولی F-12K Medium. برای ساختن محیط کامل، سرم جنین گاوی به غلظت نهایی 10% را به محیط پایه اضافه کنید:

درجه حرارت

37 درجه

شرایط نگهداری

برای اطمینان از بالاترین سطح زنده ماندن، ویال را ذوب کرده و در اسرع وقت پس از دریافت، کشت را آغاز کنید. اگر در بدو ورود، ادامه نگهداری کشت منجمد ضروری باشد، باید در فاز بخار نیتروژن مایع و نه در دمای 70- درجه سانتی گراد نگهداری شود. نگهداری در دمای -70 درجه سانتیگراد باعث از بین رفتن قابلیت زنده ماندن می شود.

1- ویال را با هم زدن ملایم در حمام آب 37 درجه سانتی گراد ذوب کنید. برای کاهش احتمال آلودگی، O-ring و کلاهک را خارج از آب نگه دارید. ذوب شدن باید سریع باشد (تقریباً 2 دقیقه).

2- به محض ذوب شدن محتویات، ویال را از حمام آب خارج کرده و با غوطه ور کردن یا پاشیدن با اتانول 70 درصد آن را ضدعفونی کنید. تمام عملیات از این نقطه به بعد باید در شرایط سخت اسپتیک انجام شود.

3- محتویات ویال را به یک فلاسک کشت بافت 75 سانتی متر مربعی منتقل کنید و با محیط کشت کامل توصیه شده رقیق کنید (اطلاعات دسته ای خاص را برای نسبت رقت توصیه شده ببینید). مهم است که از قلیایی بودن بیش از حد محیط در طول بازیابی سلول ها جلوگیری شود. پیشنهاد می شود، قبل از افزودن محتویات ویال، ظرف کشت حاوی محیط رشد حداقل به مدت 15 دقیقه در انکوباتور قرار داده شود تا محیط به pH طبیعی خود (7/0 تا 7/6) برسد.

4- کشت را در دمای 37 درجه سانتی گراد در انکوباتور مناسب انکوبه کنید. در صورت استفاده از محیطی که در این برگه محصول توضیح داده شده است، CO2 5٪ در جو هوا توصیه می شود.

اگر مایل هستید که عامل محافظ انجماد فوراً حذف شود یا سوسپانسیون سلولی غلیظ تری به دست آید، سوسپانسیون سلولی را در حدود 125g به مدت 5 تا 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید. مایع رویی را دور بریزید و سلول ها را با محیط رشد تازه با نسبت رقت توصیه شده در اطلاعات دسته خاص، مجدداً معلق کنید.

روش پاساژ دادن

حجم ها برای یک فلاسک 75 سانتی متر مربع داده شده است. مقدار محیط تفکیک مورد نیاز را متناسب با ظروف کشت با اندازه های دیگر افزایش یا کاهش دهید

1- محیط کشت را بردارید و دور بریزید.

2- به طور خلاصه لایه سلولی را با محلول 0/25% تریپسین و 0/53 میلی مولار EDTA شستشو دهید تا تمام آثار سرمی حاوی مهارکننده تریپسین پاک شود.

3- 2 تا 3 میلی لیتر محلول Trypsin-EDTA را به فلاسک اضافه کنید و سلول ها را زیر میکروسکوپ معکوس مشاهده کنید تا لایه سلولی پراکنده شود (معمولاً در عرض 5 تا 15 دقیقه).

توجه: برای جلوگیری از انباشته شدن، سلول ها را با ضربه زدن یا تکان دادن فلاسک تکان ندهید در حالی که منتظر جدا شدن سلول ها هستید. سلول هایی که به سختی جدا می شوند ممکن است در دمای 37 درجه سانتیگراد قرار داده شوند تا پراکندگی آنها تسهیل شود.

4- 6 تا 8 میلی لیتر از محیط رشد کامل را اضافه کنید و سلول ها را با پیپت کردن به آرامی آسپیره کنید.

5- مقدار مناسبی از سوسپانسیون سلولی را به رگ های کشت جدید اضافه کنید.

6- کشت ها را در دمای 37 درجه سانتی گراد انکوبه کنید.

نسبت پاساژ: نسبت ساب کالچر 1:3 تا 1:8 توصیه می شود.

تعویض محیط: هر 2 تا 3 روز

معرف برای انجماد

95% محیط کامل + 5% v/v DMSO