راهنمای خرید آگارز (Agarose)
آگارز پلی ساکاریدی می باشد که از جلبک های دریایی قرمز که دارای آگار می باشند تصفیه می شود. آگارز یک پلیمر طبیعی است و از واحدهای تکرار شونده D-گالاکتوز و 3،6-anhydro-L-گالاکتوز تشکیل شده است.حل کردن آگارز که پودر سفید رنگی است در آب جوش، باعث ایجاد محلولی شفاف می شود که در نتیجه سرد شدن باعث ایجاد ژل سفت می شود.
تشکیل ژل به علت اتصال پلیمر های قند می باشد. موردی که باید به آن توجه نمود این است که آگارز در آب سرد نامحلول می باشد.آگارز به دلیل تکرار واحد های آگاروبیوز می تواند یک پلیمر خطی را ایجاد نماید. هنگامی که آگار در حالت اولیه خود نگهداری می شود، اغلب برای رشد باکتری ها، ویروس ها، گیاهان و انواع دیگر سلول ها استفاده می شود.
غیر سمیت آگارز باعث شده است در انواع تحقیقات مختلف از جمله: الکتروفورز ، کروماتوگرافی و … کاربرد داشته باشد. جداسازی مولکول های DNA توسط آگارز انجام می گیرد. آگارز در علم پزشکی به خصوص برای تشخیص بیماری کاربرد دارد. به دلیل نقطه ذوب پایین آگارز باعث جلوگیری از فرسایش سلول ها می شود. آگارز اغلب در زیست شناسی مولکولی برای جداسازی مولکول های بزرگ، به ویژه DNA، توسط الکتروفورز استفاده می شود.
صفحات ژل آگارز (معمولاً 0.7 – 2٪) برای الکتروفورز به راحتی با ریختن محلول گرم و مایع در قالب آماده می شوند. مولکول های باردار از طریق یک ژل حرکت می کنند که جریان الکتریکی از آن عبور می کند. جریان الکتریکی در سراسر ژل اعمال می شود به طوری که یک سر ژل دارای بار مثبت و انتهای دیگر دارای بار منفی است. مولکول ها به سمت بار مخالف حرکت می کنند. برای جداسازی DNA با استفاده از الکتروفورز ژل آگارز، DNA در چاهکهای از پیش ریخته شده در ژل بارگذاری شده و جریانی اعمال میشود.
مولکول DNA (و RNA) دارای بار منفی است، بنابراین وقتی در یک میدان الکتریکی قرار می گیرد، قطعات DNA به آند با بار مثبت مهاجرت می کنند. سپس نوارهای حاصل را می توان با استفاده از نور فرابنفش (UV) مشاهده کرد. بنابراین، اندازه قطعات را می توان با کالیبره کردن ژل، با استفاده از استانداردهای اندازه شناخته شده، و مقایسه فاصله ای که قطعه ناشناخته مهاجرت کرده است، تعیین کرد.
الکتروفورز ژل آگارز معمولاً برای جداسازی مخلوط قطعات DNA با اندازه های مختلف، معمولاً پس از هضم آنزیم محدود کننده یا PCR استفاده می شود. الکتروفورز ژل آگارز همچنین میتواند برای جداسازی مولکولهای RNA مورد استفاده قرار گیرد، اگر دقت شود که از تخریب RNA جلوگیری شود. در برخی کاربردهای محدود، پپتیدها یا پروتئینها نیز ممکن است با الکتروفورز ژل آگارز خالص شوند.
اگرچه الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید (PAGE) می تواند وضوح بالاتری نسبت به الکتروفورز ژل آگارز ارائه دهد (یعنی PAGE می تواند جداسازی پاک تری از مولکول های با اندازه های مختلف ایجاد کند)، الکتروفورز ژل آگارز چندین مزیت مهم دارد: یک ژل واحد می تواند محدوده بسیار وسیع تری را از هم جدا کند. در اندازه های مولکولی، اسیدهای نوکلئیک به راحتی با رنگ آمیزی فلورسنت قابل مشاهده هستند و استخراج باندهای DNA برای خالص سازی و استفاده بعدی ساده تر و کارآمدتر است.
نکته خرید آگارز (Agarose):
- ژل آگارز برای قطعه های بزرگ DNA مناسب می باشد.
- باعث تجزیه اسید های نوکلئوییک می شود.
- آگارز عمودی دارای قدرت تجزیه و تحلیل پروتئین های بزرگ را دارا می باشد.
- خنثی بودن بار آگارز از ویژگی های مهم آن محسوب می شود.
- آگارز به دلیل دارا بودن اشکال مختلف در اغلب صنایع از جمله: صنعتی،پزشکی،دارویی،ژنتیک و… نقش دارند.
- آگارز بدون بافر و به شکل ژل دارای ماندگاری به طول چند هفته می باشد.
- نگه داری آن در دمای 4 درجه سانتی گراد ، مناسب ترین دما می باشد.
- پایدار بودن در شرایط قلیایی
- آب دوست بودن
- در واکنش ها و شناسایی آنتی بادی و آنتی ژن نقش دارد.
- استفاده از آگارز برای آزمایش حرکت و جنبش میکروارگانیسم ها
- بافر های مناسب برای آگارز TAE یا TBE می باشد که باید توجه نمود که قبل از استفاده باید به دمای مناسبی برسد که ژل سوراخ نشود.
Reviews
There are no reviews yet.