RNA Later

راهنمای خرید RNA Later

یک معرف ذخیره‌سازی بافتی غیرسمی و آبی است که به سرعت در بافت نفوذ می‌کند تا RNA سلولی را در محل در نمونه‌های یخ‌زده تثبیت و محافظت کند. تکه‌های بافت برداشت می‌شوند و بلافاصله در RNA غوطه‌ور می‌شوند بدون اینکه کیفیت یا کمیت RNA به خطر بیفتد. عنوان دیگر آن RNA PROTECTOR توانایی نگه داری RNA موجود در بافت ها  را در شرایط متفاوت را دارا می باشد و در نتیجه آن می توان بررسی مولکولی ژن ها را فراهم کند.

همانطور که اشاره شد به دلیل غیر سمی بودن می تواند به راحتی به بافت نفوذ کرده در نتیجه از RNA به راحتی مراقبت و محافظت نماید. از دیگر ویژگی و شرایط RNA Later می توان به نگه داری اسان آن در دمای محیط(25-15 درجه سانتی گراد) و عدم نیاز آن به نیتروژن مایع اشاره نمود. در واقع، RNA Later فقط یک محلول سولفات آمونیوم تقریباً اشباع شده با سیترات سدیم و با مقداری EDTA برای تشکیل شدن فلز است. اساساً وقتی به بافت یا سوسپانسیون سلولی اضافه می شود، باعث تجمع پروتئین (عمدتاً برگشت پذیر) می شود.

پس از ورود به RNA later، نمونه‌ها را می‌توان تا 1 روز در دمای 37 درجه سانتی‌گراد، یک هفته در دمای 25 درجه سانتی‌گراد، یک ماه یا بیشتر در دمای 4 درجه سانتی‌گراد، و برای طولانی‌مدت در دمای 20- یا 80- درجه نگهداری کرد. بافت را حداقل در یک بعد کمتر از 0.5 سانتی متر برش دهید و به سادگی آن را در 5 حجم محلول RNA later فرو کنید (به عنوان مثال، یک نمونه 0.5 گرمی به حدود 2.5 میلی لیتر محلول RNA later نیاز دارد). اندام های کوچک مانند کلیه، کبد و طحال موش صحرایی را می توان به طور کامل در محلول RNA later ذخیره کرد.

از دیگر نکات مهم و قابل توجه باید به این اشاره نمود که دمای بالا باعث ناپایداری RNA later شده پس در نتیجه باید از انجام اتوکلاو خودداری نمود و همچنین از RNA Later فقط باید برای بافت های تازه استفاده نمود. همچنین می توان هم DNA ژنومی و هم پروتئین کل را از نمونه های ذخیره شده در RNA later  استخراج کرد.

RNA later پروتئین‌ها را دناتوره می‌کند، بنابراین فقط با آنالیزهای معمول پروتئین مانند وسترن بلات و الکتروفورز ژل دو بعدی که به پروتئین نیاز ندارند، سازگار است. انواع سلولی که ارزیابی شده اند وقتی در RNA later در دمای 80 – درجه سانتیگراد منجمد می شوند، لیز نمی شوند. نمونه ها را می توان متعاقباً در دمای اتاق ذوب کرده و مجدداً منجمد کرد بدون اینکه بر مقدار یا یکپارچگی RNA قابل بازیافت تأثیر بگذارد.

مزایای استفاده از RNA later:

• اثربخشی(Efficacy) – تثبیت RNA به مدت 1 روز در دمای 37 درجه سانتیگراد، 1 هفته در دمای 25 درجه سانتیگراد، 1 ماه در دمای 4 درجه سانتیگراد یا به طور نامحدود در دمای 20- درجه سانتیگراد.
• Simplicity – معرف‌ای که فوراً RNase را غیرفعال می‌کند و RNA را در بافت‌ها و سلول‌ها تثبیت می‌کند.
• سهولت استفادهEase of use)(- بدون نیاز به خشک کردن نمونه ها در نیتروژن مایع یا انتقال سریع آنها به فریزر آزمایشگاهی.
• تحرک(Mobility) – ایده آل برای به دست آوردن بافت در خارج از آزمایشگاه.
• تطبیق پذیریVersatility)(- سازگار با بسیاری از روش های جداسازی RNAمی‌باشد، از جمله اکثر کیت های جداسازی RNA.

توجه خرید RNA Later:

به دلیل عملکرد اصلی این محلول(RNA later) که حفظ RNA  می باشد، اگر اپراتور مجبور به استخراج RNA از یک نمونه شد باید از حذف کامل این محلول اطمینان پیدا کرده باشد که در نتیجه آن می بایست از بافر PBS برای شست و شوی بافت استفاده کرده و سپس سانتریوفیوژ انجام داده تا این محلول از بین برود.

مشاهده لیست کامل مواد آزمایشگاهی