محلول فایکول

خرید محلول فایکول (Ficoll):

فایکول یک محلول آزمایشگاهی می باشد که بدون رنگ(بی رنگ) و استریل بوده و ترکیبی از پودر فایکول و سدیم دیاتروزدات می باشد. این محلول به راحتی در آب حل شده (یک کوپلیمر آبدوست از ساکارز و اپی کلروهیدرین ) و جرم زیادی را دارا می باشد.

محلول Ficoll کاملا غیر یونی است.محلول فایکول دارای کاربرد های نام برده می باشد از جمله : در جداسازی لنفوسیت های T ، B از خون محیطی مغز استخوان و خون بند ناف و همچنین در جداسازی سلول های تک هسته ای (PBMC) در تحقیقات و مطالعات آزمایشگاهی نقش دارد.

در کل می توان گفت محلول فایکول یک روش غیر اختصاصی برای جداسازی خون به اجزای آن است که در مطالعات زیست شناسی مولکولی و بیوشیمی کاربرد دارد. فایکول به دلیل دارا بودن دیاتریزوات سدیم به نور حساس بوده در نتیجه باید این محلول در برابر نور قرار نگیرد.

قرار گرفتن سلولها در محلول فایکول برای زمان طولانی بسیار سمی بوده در نتیجه سانتریوفیوژ گرادیان فقط در بعضی مواقع خاص و شرایط اضطرار صورت می گیرد.

برای ایجاد شیب Ficoll ، ابتدا نمونه خون را به یک لوله جمع آوری خون هپارین منتقل کرده و به آرامی همگن می کنیم و سپس به یک لوله حاوی PBS اضافه کرده و به طور مجدد لوله حاوی خون و PBS را به یک لوله جدید مخروطی منتقل کرده و سپس محلول فایکول را اضافه کرده تا شیب مد نظر ایجاد شود(پیوسته و نا پیوسته).

Ficoll یک پلی ساکارید بی اثر با وزن مولکولی بالا است که به PBMC ها اجازه می دهد پس از سانتریفیوژ از خون کامل جدا شوند. Ficoll بخشی از Ficoll-Paque است که در آزمایشگاه های زیست شناسی برای جداسازی خون از اجزای آن (گلبول های قرمز، لکوسیت ها و غیره) استفاده می شود.

Ficoll-Paque معمولاً در پایین یک لوله مخروطی قرار می گیرد و سپس خون به آرامی در بالای Ficoll-Paque قرار می گیرد. سانتریفیوژ گرادیان تراکم فیکول یکی از متداول‌ترین روش‌های مورد استفاده برای جداسازی و غنی‌سازی سلول‌های تک هسته‌ای انسان، به‌ویژه از خون محیطی و سایر مایعات بیولوژیکی، مانند خون بند ناف و مغز استخوان است.

جداسازی سلول‌های مرده و سلول‌های زنده از طریق سانتریفیوژ شیب چگالی Percoll یا Ficoll نسبتاً ساده است. سلول را به لوله منتقل کرده و به مدت 3-5 دقیقه با 1200 دور در دقیقه در روتور swing out سانتریفیوژ کنید. مایع رویی را بردارید و سلولها را مجدداً در حالت معلق قرار دهید.

چگونگی کار با محلول فایکول به شرح زیر می باشد:

بطری مدیا Ficoll-Paque را چندین بار برعکس کنید تا از مخلوط کردن کامل اطمینان حاصل کنید.

محیط Ficoll-Paque (3 میلی لیتر) را به لوله سانتریفیوژ اضافه کنید.

نمونه خون رقیق شده را با دقت روی محلول مدیا فیکول-پاک قرار دهید.

سانتریفیوژ در 400 گرم به مدت 30 تا 40 دقیقه در دمای 18 تا 20 درجه سانتیگراد (ترمز باید خاموش شود)

نکته:

• فایکول را می توان با اتوکلاو در pH خنثی، در دمای 110 درجه سانتی گراد به مدت 30 دقیقه استریل کرد. از عوامل اکسید کننده و کاهنده قوی باید اجتناب شود.
• برای تهیه 20% (ficoll, w/v)، Ficoll 400 را در H2O استریل حل کرده و محلول را در مقادیر 100 میکرولیتری منجمد در دمای 20- درجه سانتیگراد نگهداری کنید.
• قرار گرفتن طولانی مدت در معرض Ficoll-Hypaque برای سلول ها سمی است و سانتریفیوژ با گرادیان تنها در صورت لزوم باید انجام شود.
• حلالیت Ficoll 400 را در 1 گرم در 10 میلی لیتر آب دیونیزه آزمایش شد و محلولی شفاف و بی رنگ تا زرد کم رنگ به دست می آید.
• فیکول در محلول های قلیایی و خنثی پایدار است. در مقادیر pH کمتر از 3، به سرعت هیدرولیز می شود، به ویژه در دماهای بالا.
• فیکول را می توان با اتوکلاو در pH خنثی، در دمای 110 درجه سانتی گراد به مدت 30 دقیقه استریل کرد.

مشاهده لیست مواد آزمایشگاهی

مشاهده در سایت سیگما