کیت استخراج اگزوزوم

نکات

1. قبل از شروع، Reagent A را ورتکس کرده و تا دمای37 °C  گرم کنید تا کریستال های موجود در بافر از بین بروند.
2. از روشن و آماده بودن سانتریفیوژ در دمای اتاق اطمینان حاصل کنید.
3. نمونه را در دمای 4 °C یا روی یخ ذوب کنید.
4. همه ی بافر ها را در دمای2_8 °C  و به دور از نور نگهداری کنید.
5. بافر ها حداقل 6 ماه در میکروتیوب های باز شده پایدار هستند.

عیب یابی

1. عدم مشاهده رسوب

برخی از مایعات زیستی ( Bio Fluids ) رسوب ضعیفی داشته یا هیچ رسوبی در آنها مشاهده نمی شود. عدم مشاهده رسوب به شکل واضح به معنای شکست در روش استخراج نیست. برای رفع این مشکل لطفا اطمینان حاصل کنید که نمونه اضافه شده است. همچنین زمان انکوباسیون را به یک شب (Overnight ) افزایش دهید.

2. ایجاد کریستال در بافر ها

در صورت مشاهده کریستال در reagent A ، آن را تا دمای 45 °C گرم کرده و همزمان با ورتکس میکس کنید تا کریستال ها از بین بروند.

Protocol

1. نمونه را به مدت 10 min در 3000 rpm سانتریفیوژ کرده تا اجزا و بقایای سلولی حذف شوند.
2. برای دست یابی به نتیجه بهتر نمونه را با فیلتر های 22 µm یا 0.45 µm فیلتر کنید.
3. Reagent A را ورتکس کرده و تا دمای 37 °C گرم کنید.
4. نمونه و Reagent A را با نسبت 1:5ترکیب کنید (نمونه: 5   Reagent A : 1 ).
5. میکروتیوب را به مدت 5 min ورتکس کرده تا به خوبی ترکیب شوند (محلول باید حالت ابری داشته باشد).
6. محلول را به مدت 12 h در دمای 4 °C انکوبه کنید. )برای دست یابی به نتیجه بهتر، میکروتیوب را هر 1 h شیک کنید(.
7. میکروتیوب را به مدت 1 min ورتکس کنید.
8. میکروتیوب را به مدت 40 min در 3000 rpm در دمای 4 °C سانتریفیوژ کنید.
9. محلول رویی را به طور کامل برداشته و دور بریزید.
10. رسوب باقی مانده ( اگزوزوم) را با 50_ 200 µl از Reagent B به طور کامل حل کنید.
11. اگزوزوم جداسازی شده در دمای 4 °C به مدت چند روز و در دمای -20 °C یا -80 °C به مدت طولانی قابل نگهداری است.