IPTG

راهنمای خرید IPTG:

ایزوپروپیل β-d-1-تیوگالاکتوپیرانوسید (IPTG) یک معرف بیولوژی مولکولی است. این ترکیب یک تقلید مولکولی از آلولاکتوز است، یک متابولیت لاکتوز که رونویسی اپرون lac را تحریک می کند، و بنابراین برای القای بیان پروتئین در جایی که ژن تحت کنترل اپراتور lac است استفاده می شود. IPTG یک رپرسور را از اپرون لاک حذف می کند تا بیان ژن را القا کند.

آلولاکتوز ایزومر لاکتوز است که با ورود لاکتوز به سلول ها تشکیل می شود. این به عنوان یک القا کننده برای شروع رونویسی ژن ها در اپرون لاک عمل می کند.با اتصال به رپرسور و مهار آن به عنوان یک القاکننده فعالیت گالاکتوزیداز عمل می کند. برای القای بیان از پروموتر لاک و مشتقات استفاده می شود.

مانند آلولاکتوز، IPTG به رپرسور lac متصل می شود و رپرسور تترامری را از اپراتور لاک به روشی آلوستریک آزاد می کند و در نتیجه امکان رونویسی ژن ها در اپرون لاک را فراهم می کند. IPTG برای تحریک بیان ژن هایی که در زیر پروموتر اپرون لاک متابولیسم کننده لاکتوز قرار می گیرند استفاده می شود.

غلظت IPTG اثر منفی دارد و می‌تواند ده برابر غلظتی که معمولاً در بیولوژی مولکولی استفاده می‌شود (1 میلی‌مولار) کمتر باشد، در حالی که بیان را در سطوح مشابه حفظ می‌کند و آسیب کمتری به رشد سلولی القا می‌کند. در غلظت کم، IPTG از طریق لاکتوز پرماز وارد سلول ها می شود، اما در غلظت های بالا (معمولاً برای القای پروتئین استفاده می شود)، IPTG می تواند مستقل از لاکتوز پرماز وارد سلول ها شود.

تحقیقات نشان داده است که:

• اگر بیش از حد از IPTG استفاده کنید، باعث مرگ سلولی می شود و مواد گران قیمتی مانند IPTG را هدر می دهید. اگر پروموتر شما با آن کار می کند، توصیه می‌شود تولید را با لاکتوز القا کنید، می تواند به عنوان منبع کربن عمل کند. لاکتوز هم به عنوان منبع کربن و هم به عنوان القا کننده عمل می کند. بنابراین به عنوان یک بستر مصرف می شود، که ممکن است توانایی به عنوان القا کننده را کاهش دهد. بخش خوب این است که لاکتوز بیش از حد برای رشد سلول مضر نیست. در مقابل، IPTG فقط به عنوان القا کننده عمل می کند و نمی تواند متابولیزه شود، بنابراین پایدارتر است.
• IPTG یک القاء کننده بی ضرر نیست. درعوض، سمیت سوبسترای هالوآلکان را تشدید می‌کند و باعث آسیب قابل ملاحظه ای به میزبان coli BL21(DE3) می شود که به دلیل محتوای پلاسمیدهای حامل ژن های مسیر متابولیک مصنوعی، بار متابولیکی را تحمل می کند. IPTG آنالوگ گالاکتوز است که غیر قابل سوخت و ساز است و سرکوب کننده لاک را غیرفعال می کند تا سنتز β-گالاکتوزیداز را در E.coli القا کند. بیان ژن های کلون شده تحت کنترل اپرون lac توسط IPTG القا می شود.
• سیستم القایی IPTG به طور گسترده برای بیان پروتئین نوترکیب در coli استفاده شده است. اجزای آن مانند پروموتر لاک، اپراتور لاک، سرکوب کننده لاک و انواع آنها همراه با T7 یا سایر پروموترها در ترکیبات مختلف برای دستیابی به تنظیم بهتر در بیان ژن استفاده شده است.
• غلظت‌های بالاتر IPTG به دلیل افزایش میزان بیان، میزان پروتئین را در بخش نامحلول افزایش داد. نتیجه گیری شد که غلظت IPTG بر میزان بیان پرترومبین-2 تأثیر می گذارد.
• در حالی که غلظت القاء کننده بهینه 0.1 میلی مولار IPTG در 28 درجه سانتیگراد است، در 34 و 37 درجه سانتیگراد به 0.05 میلی مولار IPTG کاهش می یابد.

IPTG در حلال های آلی مانند اتانول، DMSO و دی متیل فرمامید (DMF) محلول است، که باید با گاز بی اثر پاک شود. حلالیت IPTG در اتانول و DMSO تقریبا 20 میلی گرم بر میلی لیتر و در DMF تقریباً 30 میلی گرم در میلی لیتر است.

مشاهده لیست کامل مواد آزمایشگاهی