تکنیک ها
تست MTT چیست؟
تست MTT چیست؟
تست MTT به عنوان تستی برای بررسی میزان زنده مانی سلول یا بررسی اثر سمیت دارو ها یا دیگر مکمل ها بر سلول است که با تاثیر بر روی اندامک های درون سلولی می تواند بین سلول زنده و مرده تمایز قائل شود.
فعالیت و سرعت تکثیر سلول ها ممکن است تحت تاثیر هورمون ها، فاکتورهای رشد، سایتوکاین ها و میتوژن ها افزایش داشته باشد یا تغییری نکند. همینطور بعضی از داروها و عوامل سایتوتوکسیک مثل داروهای ضد سرطان ممکن است باعث نکروز یا آپوپتوز سلول‌ها یا کاهش سرعت تکثیر و رشد و یا از بین رفتن ساختار سلول ها شود.
تست MTT مخفف چیست؟
MTT assay که مخفف MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromideمی باشد، يک روش رنگ سنجی است که بر اساس احیا شدن و شکسته شدن کریستال های زرد رنگ تترازولیوم به وسیله ی آنزیم سوکسینات دهیدروژناز و تشکیل کریستال های بنفش رنگ نا محلول انجام می شود. در این روش برخلاف سایر روش ها مراحل شستشو و جمع آوری سلول که اغلب باعث از دست رفتن تعدادی از سلول ها و افزایش خطای کار می شود، حذف شده و تمام مراحل آزمایش از ابتدای کشت سلول تا خواندن نتایج با فوتومتر و همچنین تفسیر این تست در یک میکرو پلیت انجام می شود، بنابراین تکرارپذیری، دقت و حساسیت آزمایش بالاست.
مراحل تست MTT
این تست دارای 3 مرحله اصلی شامل Seeding ، Treatment و MTT است هر کدام یک روز زمان می برد. همچنین روز MTT بسته به نوع سلول و دارو، می تواند 24 ، 48 و یا 72 ساعت پس از روز Treatment باشد.
در صورتی که آزمایش روی سلول های چسبیده به پلیت و به صورت پیوسته انجام شود، ابتدا باید تعداد مناسبی سلول را در هر یک از چاهک ها کشت داد و اجازه داد( حدود 24 ساعت) که سلول ها به کف پلیت بچسپند و به حالت پایدار دربیایند. سپس چاهک های کنترل(Blank ,C+) و آزمایش را انتخاب می کنیم و مقدار مناسبی از ماده ی میتوژن یا داروی موردنظر را به چاهک های آزمایش اضافه می کنیم و پلیت را تا زمان مورد نیاز در انکوباتور می گذاریم تا ماده ی موردنظر روی سلول ها تاثیر کند.
بعد از اتمام زمان انکوباسیون محیط کشت رویی را دور می ریزیم و به هر چاهک ۲۰۰ میکرولیتر محیط کشت حاوی نیم میلی گرم در میلی لیتر محلول MTT اضافه می کنیم و مجددا برای ۲ تا ۴ ساعت در انکوباتور دی اکسیدکربن در ۳۷ درجه سانتی گراد قرار می دهیم.
در طی زمان انکوباسیون MTT توسط سیستم سوکسینات دهیدروژناز که یکی از آنزیم های چرخه ی تنفسی میتوکندریهاست احیا می شود. احیا و شکسته شدن این حلقه باعث تولید کریستال های بنفش-آبی رنگ فورمازان می شود که در زیر میکروسکوپ به راحتی قابل تشخیص هستند. میزان رنگ تولید شده با تعداد سلول هایی که از نظر متابولیک فعال هستند(سلول های زنده) رابطه ی مستقیم دارد.
کریستال های فورمازان توی آب غیر محلول هستند و باید قبل از رنگ سنجی با ماده ی حلالی مانند دی متیل سولفوکساید(DMSO) به حالت محلول دربیایند. در نهایت جذب نوری محلول بدست آمده را می توان در طول موج ۵۷۰ نانومتر خواند و به کمک منحنی استاندارد داده ها را تفسیر کرد. برای هر تیره ی سلولی ارتباط خطی بین تعداد سلول ها و جذب نوری محلول نهایی وجود دارد. پس برای بررسی هر نوع سلول باید منحنی استاندارد مربوط به همان تیره ی سلولی را رسم و استفاده کرد.
برای سفارش انجام تست MTT، اطلاع از هزینه تست MTT برروی لینک زیر کلیک کنید:
برای آشنایی با آزمایشگاه کشت سلول ژنیران بر روی لینک زیر کلیک کنید
برای یادگیری کامل تکنیک های آزمایشکاه کشت درلینک زیر کلیک کنید.
برای مشاهده سایر خدمات آزمایشگاه کشت لینک زیر کلیک کنید
خدمات کشت سلولی آزمایشگاه ژنیران
قیمت این تست چقدر حدودا برای یک کرم و اینکه کجا میتونم انجام بدم
در این مرکز تست mtt انجام میشود. جهت استعلام قیمت و جزئیات با ما تماس بگیرید
آیا تست mtt را میتوان با دارویی که رنگ سیاه دارد امتحان نمود
چالش‌های استفاده از دارو با رنگ تیره در تست MTT:
تداخل نوری: اگر دارویی که مورد استفاده قرار می‌گیرد دارای رنگ سیاه یا تیره باشد، ممکن است در خواندن نتایج تست تداخل ایجاد کند. رنگ تیره می‌تواند جذب نور در طول موج‌های مشابه با طول موجی که برای خواندن محصول فرمازان MTT (حدود ۵۶۰ نانومتر) استفاده میشود، داشته باشد. این امر می‌تواند منجر به خواندن‌های غلط یا نادرست شود.
راه‌حل‌ها و پیشنهادات:
تغییر دوز: اگر ممکن است، استفاده از دوزهای پایین‌تر دارو که تداخل کمتری ایجاد کنند، بدون آنکه اثربخشی آن‌ها کاهش یابد.
پیش تصفیه نمونه: در صورت امکان، نمونه‌ها را قبل از انجام تست MTT تصفیه کنید تا رنگ‌های اضافی حذف شوند.
استفاده از روش‌های دیگر: بررسی امکان استفاده از روش‌های دیگری که کمتر تحت تأثیر رنگ دارو قرار می‌گیرند، مانند تست‌های سلول زنده مبتنی بر فلورسانس یا تست‌های مبتنی بر ATP.
مقایسه کنترل‌ها: استفاده از کنترل‌های دقیق برای ارزیابی میزان تداخل دارو در آزمایش و تعیین میزان اصلاحات لازم برای دستیابی به نتایج قابل قبول.
بنابراین، استفاده از دارویی با رنگ سیاه در تست MTT می‌تواند نیاز به تنظیمات خاص داشته باشد تا از دقت نتایج اطمینان حاصل شود. پیش از انجام آزمایش، بررسی دقیق برای فهمیدن بهترین روش برای کاهش تأثیر رنگ دارو ضروری است.
سلام، وقت بخیر؛
امکان انجام تست MTT روی رده‌ی سلول‌های ملانومای پوست موش رو دارید؟
هزینه‌ی اجرای تست حدودا چقدره؟
سلام، جهت استعلام قیمت و مشاوره رایگان با ما تماس بگیرید
سلام من رنگ mtt ساختم ولی بنفش رنگ نشد. علتش چی می تونه باشه؟
سلام علت های مختلفی میتونه داشته باشه
شما بایستی تمام مواد و ترکیباتی رو که در تست mtt به کار میبرید بصورت روتین مورد کنترل و پایش قرار بدین که تاریخشون نگذشته باشه یا مواد ماهیت شون تغییر پیدا نکرده باشه ویا اینکه مورد دیگه ای که علاوه بر مواد در پروسه تهیه رنگ موثره اینه که شما هم تبحر لازم رو داشته باشین و مسیر رو نقطه به نقطه درست پیش برید
کارگاهی برای اموزش کشت سلول دارید؟