تست متیل رد (Methyl Red): قواعد، روش و تفسیر نتایج

تست متیل رد (Methyl Red) تولید اسید کافی را در طی تخمیر گلوکز و حفظ شرایطی که در یک کشت قدیمی مقدار PH حدود 4.5 حفظ می‌شود، تشخیص می‌دهد. نشانگر متیل رد (Methyl Red) در پایان دوره انکوباسیون اضافه می‌شود.

Clark and Lubs هردو MR-VP را توسعه دادند که به هر دو تست MR و VP اجازه می‌داد از یک محیط تلقیح شده با تقسیم بخش‌ها به لوله‌های مختلف انجام شود.

اصل تست متیل رد (Methyl Red)

برخی از باکتری‌ها توانایی استفاده از گلوکز و تبدیل آن را به اسیدی پایدار مانند اسید لاکتیک (lactic acid)، اسید استیک (acetic acid) یا اسید فرمیک (formic acid) به عنوان محصول نهایی دارند.

این باکتری‌ها در ابتدا گلوکز را به اسید پیروویک (glucose to pyruvic acid) متابولیزه می‌کنند، که بیشتر از طریق «مسیر اسید مخلوط برای تولید اسید پایدار» متابولیزه می‌شود. نوع اسید تولید شده از گونه‌ای به گونه دیگر متفاوت است و به مسیرهای آنزیمی خاص موجود در باکتری بستگی دارد. اسید تولید شده PH را به 4.5 یا کمتر کاهش می‌دهد که با تغییر رنگ متیل رد از زرد به قرمز نشان داده می‌شود.

در تست متیل رد (Methyl Red)، باکتری مورد آزمایش در محیط براث (broth) حاوی گلوکز رشد می‌کند. اگر باکتری توانایی استفاده از گلوکز را با تولید اسید پایدار داشته باشد، رنگ متیل رد (Methyl Red)، زمانی که به کشت براث اضافه می‌شود، از زرد به قرمز تغییر می‌کند.

معرف‌های مورد استفاده در تست متیل رد (Methyl Red)

براث (broth)  MRVP (pH 6.9)

مواد لازم در هر لیتر آب دیونیزه (deionized ):

پپتون بافر (buffered peptone) = 7.0 گرم

گلوکز (glucose) = 5.0 گرم

دی پتاسیم فسفات (dipotassium phosphate) = 5.0 گرم

محلول متیل رد (Methyl red)، 0.02٪

1. 0/1 گرم متیل رد (Methyl Red) را در 300 میلی لیتر اتیل الکل (ethyl alcohol) 95 درصد حل کنید.
2. به اندازه کافی آب مقطر اضافه کنید تا به 500 میلی لیتر برسد.
3. در دمای 4 تا 8 درجه سانتیگراد در بطری قهوه ای نگهداری شود. محلول به مدت 1 سال پایدار است.

روش آزمایش متیل رد (Methyl Red)

• قبل از تلقیح، اجازه دهید محیط تا دمای اتاق متعادل شود.
• با استفاده از ارگانیسم‌های گرفته شده از یک کشت خالص 18-24 ساعته، محیط را به آرامی تلقیح کنید.
• در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 24 ساعت انکوبه کنید.
• پس از 24 ساعت انکوباسیون (incubation)، 1 میلی لیتر از براث را به یک لوله آزمایش تقسیم کنید.
• مابقی براث را برای 24 ساعت دیگر مجدداً انکوبه کنید.
• 2 تا 3 قطره نشانگر متیل رد (Methyl Red) را به مقدار کافی اضافه کنید.
• فورا رنگ قرمز را مشاهده می‌کنید.

تفسیر نتایج تست متیل رد (Methyl Red)

موارد استفاده از تست متیل رد (Methyl Red)

در ابتدا از تست‌های MR-VP دوتایی برای تمایز بین اعضای خانواده انتروباکتریاسه (Enterobacteriaceae) استفاده می‌شد، اما اکنون از آن‌ها برای مشخص کردن سایر گروه‌های باکتری از جمله اکتینوباکتریا (Actinobacteria) استفاده می‌شود.

تست کنترل کیفیت متیل رد (Methyl Red)

کلبسیلا پنومونیه (Klebsiella pneumoniae) ATCC 13883-MR منفی (زرد)

اشریشیا کلی (Escherichia coli ATCC)  ATCC 25922-MR مثبت (قرمز)

محدودیت‌های تست متیل رد (Methyl Red)

1. توصیه می‌شود برای شناسایی کامل آزمایشات بیوشیمیایی بیشتری روی کشت‌های خالص انجام شود.
2. تست متیل رد (Methyl Red) نباید انجام شود مگر اینکه محیط برای حداقل 48 ساعت انکوبه شده باشد. آزمایش‌هایی که خیلی زود انجام می‌شوند ممکن است به تفسیر مثبت کاذب منجر شوند.
3. مهم است که از تلقیح سبک استفاده شود. اگر تلقیح بیش از حد سنگین باشد، رشد باکتری ممکن است مهار شود و نتایج آزمایش نامعتبر باشد.
4. دوره انکوبه تا 5 روز ممکن است برای آزمایش متیل رد (Methyl Red) ضروری باشد.

مطالعه بیشتر:

تست ایندول (Indole): اصول، شناساگر‌ها، روش، تفسیر نتایج و محدودیت‌ها

تست حساسیت به باسیتراسین (Bacitracin Susceptibility Test): اصول، روش، موارد استفاده و تفسیر

مترجم: بهار کنعانی

منبع